一、細胞簡介

細胞簡介

此細胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點形成試驗陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

細胞名稱

RAW 264.7 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

細胞別稱

RAW264; RAW2647; RAW264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; Raw264.7

細胞貨號

Delf-10350

來源

鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；單核細胞；巨噬細胞

細胞形態(tài)

不規(guī)則圓形，紡錘狀

生長特性

貼壁細胞，少量懸浮

鑒定報告

提供種屬鑒定

培養(yǎng)條件

DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺，0.11g / L丙酮酸鈉)培養(yǎng)基；

優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%（貨號：Delf-11405）；

雙抗1%（貨號：Delf-15487）。

注意事項：

（a）在細胞生長的初始階段，細胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有“偽足”延伸。隨著培養(yǎng)時間的增加，細胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度，會有細胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細胞會同時出現(xiàn)。

（b）該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時，用無菌細胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。

（c）該細胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應(yīng)收集起來，離心后細胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。

（d）血清質(zhì)量差異可能引起細胞貼壁能力變化，應(yīng)選用高質(zhì)量的胎牛血清。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次，連同PBS一同回收離心管中；
3、將培養(yǎng)瓶中懸浮的細胞收集完后，使用細胞刮刀收集瓶內(nèi)貼壁細胞；
4、將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和收集到的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清；
5、補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中；
6、添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力；

注意事項

該細胞不用胰酶消化，使用細胞刮刀

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無血清非程序細胞凍存液Delf-16090進行凍存細胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細胞，計數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml；
2、將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑