一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

細(xì)胞簡(jiǎn)介

此細(xì)胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對(duì)腫瘤靶細(xì)胞無(wú)作用。該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。

細(xì)胞名稱

RAW264.7+GFP 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記

細(xì)胞別稱

RAW264+GFP; RAW2647+GFP; RAW264.7+GFP; RAW-264.7+GFP; Raw 264.7+GFP; Raw264.7+GFP

細(xì)胞貨號(hào)

Delf-11527

來(lái)源

BALB/c鼠；腹水

細(xì)胞形態(tài)

不規(guī)則圓形，紡錘狀

生長(zhǎng)特性

懸浮和貼壁細(xì)胞混合生長(zhǎng)

培養(yǎng)條件

DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺，0.11g / L丙酮酸鈉)培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%；雙抗1%。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）

傳代方法

1、將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次，連同PBS一同回收離心管中；
3、將培養(yǎng)瓶中懸浮的細(xì)胞收集完后，使用細(xì)胞刮刀收集瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞；
4、將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和收集到的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min，棄去上清；
5、補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中；
6、添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力；

注意事項(xiàng)

該細(xì)胞不用胰酶消化，使用細(xì)胞刮刀

注意事項(xiàng)：

（a）在細(xì)胞生長(zhǎng)的初始階段，細(xì)胞以貼壁的形式生長(zhǎng)并呈現(xiàn)出長(zhǎng)方體的形態(tài)和有“偽足”延伸。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，細(xì)胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長(zhǎng)。細(xì)胞密度達(dá)到一定的程度，會(huì)有細(xì)胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會(huì)發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細(xì)胞會(huì)同時(shí)出現(xiàn)。

（b）該細(xì)胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化。傳代時(shí)，用無(wú)菌細(xì)胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。

（c）該細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細(xì)胞密度較大時(shí)，細(xì)胞會(huì)輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆積在一起，有些細(xì)胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細(xì)胞是存活的，在傳代時(shí)應(yīng)收集起來(lái)，離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。

（d）血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞貼壁能力變化，應(yīng)選用高質(zhì)量的胎牛血清。

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無(wú)血清非程序細(xì)胞凍存液Delf-16090進(jìn)行凍存細(xì)胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml；
2、將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；

五、注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

1、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。