一、細胞簡介

細胞簡介

人急性髓母白血病細胞，該細胞復蘇后需要兩周左右恢復正常生長。STR結果如下：D5S818: 9,11；D13S317: 11,13；D7S820: 8,11；D16S539: 9,12；vWA: 14；THO1: 6,9；Amelogenin: X；TPOX: 8,9；CSF1PO: 10,12

細胞名稱

Kasumi-1 人紅白血病細胞

細胞別稱

KASUMI-1; Kasumi 1; KASUMI1; Kasumi1

細胞貨號

Delf-10580

來源

紅白血病細胞

細胞形態(tài)

原粒細胞

生長特性

懸浮生長

培養(yǎng)條件

1、1640培養(yǎng)基（貨號：Delf-16564）；

2、優(yōu)質胎牛血清+20%（貨號：Delf-11405）；

3、GlutaMAX-1谷氨酰胺+1%（貨號：Delf-16091）；

4、Sodium Pyruvate丙酮酸鈉+1%（貨號：Delf-16093）；

5、P/S+1%（貨號：Delf-15487）；

注意事項：
a) 該細胞復蘇后成活率較低，會出現(xiàn)大量死細胞和死細胞碎片，培養(yǎng)兩周后有所好轉。建議每1-2周對細胞進行1000rpm, 5mins離心，棄掉上清，加入新鮮完全培養(yǎng)液，可以去掉部分細胞碎片和顆粒。培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)死細胞和細胞碎片，收到郵寄的活細胞的用戶若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物內(nèi)有部分死細胞和細胞碎片，此為正常現(xiàn)象。
b) 細胞培養(yǎng)過程中會有輕微聚團，輕輕吹打開即可。當細胞密度較大或者培養(yǎng)液變黃時，需要及時進行半換液或者完全換液。
c) 該細胞對血清質量較為敏感，我?guī)旖ㄗh您使用進口大品牌優(yōu)質血清進行培養(yǎng)。
d) 請注意保持細胞密度在合適的范圍（3x10^5 ~ 3x10^6 /ml），不能過稀。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復蘇方法

復蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法（懸浮細胞）

傳代比例

1:2（不同細胞情況具體對待）

傳代方法

1、當細胞量達到 8-10×10⁵cell/ml 時，可進行傳代；

2、在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的細胞懸液至離心管中；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、準備兩個新的T-25 培養(yǎng)瓶。向細胞沉淀加入完全培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細胞密度為2-4×10⁵cell/ml，均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶中，每瓶約6-8ml；

5、水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

注意事項

注意收集懸浮的細胞

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無血清非程序細胞凍存液Delf-16090進行凍存細胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

建議每瓶T25瓶凍存1支。

凍存方法

1、待細胞生長狀態(tài)良好時，即可進行細胞凍存；

2、收集細胞懸液，計數(shù)；

3、1000rpm離心5min，離心完成后，棄上清；

4、加入細胞凍存液重懸細胞沉淀，調(diào)整細胞密度為2×10⁶cell/ml，輕輕混勻后，將細胞懸液加入凍存管，1ml/支。

5、將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；

6、次日取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存；

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑