一、細(xì)胞簡介

細(xì)胞簡介

該細(xì)胞來源于人的正常外周血組織。

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）是具有免疫調(diào)節(jié)活性的T細(xì)胞亞群，在維持機體的免疫耐受以及調(diào)控免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮重要作用。Treg細(xì)胞通過其表面表達(dá)一致性分子，分泌抑炎性細(xì)胞因子，直接發(fā)揮細(xì)胞毒作用以及改變抗原呈遞細(xì)胞的抗原提呈功能而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞屬于CD4+T細(xì)胞亞群，占正常人外周血及脾臟組織中的CD4+T細(xì)胞的5%-10%。

細(xì)胞名稱

人原代Treg細(xì)胞

細(xì)胞別稱

Human primary Treg cells

細(xì)胞貨號

Delf-16785

來源

人；正常外周血

細(xì)胞形態(tài)

圓形細(xì)胞

生長特性

懸浮生長

細(xì)胞鑒定

CD4和CD25免疫熒光染色為陽性。

培養(yǎng)條件

推薦使用人原代Treg細(xì)胞專用培養(yǎng)基（貨號：Delf-16785）來培養(yǎng)該細(xì)胞。

名稱

體積

濃度

保存條件

人原代Treg細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基

440ml

1×

4℃、避光

人原代Treg細(xì)胞培養(yǎng)添加劑

5ml

100×

-20℃、避光

胎牛血清（FBS）

50ml

終濃度10%

-20℃、避光

雙抗（青霉素/鏈霉素，P/S）

5ml

100×

-20℃、避光

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法（懸浮細(xì)胞）

傳代比例

1:2（不同細(xì)胞情況具體對待）

傳代方法

1、當(dāng)細(xì)胞量達(dá)到 8-10×10⁵cell/ml 時，可進(jìn)行傳代；

2、在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的細(xì)胞懸液至離心管中；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、準(zhǔn)備兩個新的T-25 培養(yǎng)瓶。向細(xì)胞沉淀加入完全培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為2-4×10⁵cell/ml，均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶中，每瓶約6-8ml；

5、水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

注意事項

注意收集懸浮的細(xì)胞

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用原代細(xì)胞無血清凍存液Delf-11614進(jìn)行凍存細(xì)胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細(xì)胞，計數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細(xì)胞/ml（本公司是1個T25培養(yǎng)瓶長滿凍存1支凍存管）；
2、將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細(xì)胞培養(yǎng)清除試劑