服務(wù)介紹：

抗原抗體的結(jié)合非常特異。免疫熒光單標(biāo)是用與目標(biāo)蛋白對(duì)應(yīng)的特異性的第一抗體去孵育組織切片，然后再利用對(duì)應(yīng)的帶有熒光染料的第二抗體與第一抗體結(jié)合，在組織切片掃描儀或者熒光顯微鏡下用熒光染料對(duì)應(yīng)波長的光去激發(fā)染料發(fā)出熒光進(jìn)而將目標(biāo)蛋白通過間接標(biāo)記的方式顯示出來。也可以利用TSA技術(shù)進(jìn)行熒光標(biāo)記，有信號(hào)放大的作用。TSA技術(shù)主要原理為用HRP標(biāo)記的第二抗體與第一抗體結(jié)合后，再孵育熒光標(biāo)記的酪胺（TSA），TSA在二抗上偶聯(lián)的HRP與H₂O₂的作用下變?yōu)榛罨睦野凡⒏街谀繕?biāo)蛋白周圍的蛋白酪氨酸殘基上，在組織切片掃描儀或者熒光顯微鏡下用熒光染料對(duì)應(yīng)波長的光去激發(fā)染料發(fā)出熒光進(jìn)而將目標(biāo)蛋白通過間接標(biāo)記的方式顯示出來。利用TSA技術(shù)也可進(jìn)行多種蛋白同時(shí)標(biāo)記，每輪標(biāo)記都按一抗-二抗-TSA的順序?qū)ο鄳?yīng)抗原進(jìn)行標(biāo)記，每輪染色只需改變TSA熒光染料種類即可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶標(biāo)用不同熒光染料進(jìn)行共同標(biāo)記。

切片數(shù)字掃描是通過控制顯微成像系統(tǒng)和切片以一定的規(guī)則運(yùn)動(dòng)，采集多張連續(xù)的高分辨率顯微圖像再無縫拼接生成一張高分辨率的組織切片全景圖像。該圖像包含了玻片上所有的信息，可在電腦上用瀏覽軟件任意放大和縮小，任意部位觀察采圖，是真正脫離顯微鏡的閱片方式。通過在掃描儀上加載與免疫標(biāo)記時(shí)熒光染料匹配的最佳激發(fā)波長和發(fā)射波長的濾光塊，獲取不同熒光通道的圖像。可單通道，多通道任意組合瀏覽并按需采圖。

掃描的熒光圖像可以用軟件對(duì)陽性信號(hào)進(jìn)行半定量分析，用數(shù)據(jù)去評(píng)價(jià)陽性的強(qiáng)弱。對(duì)于陽性為單個(gè)細(xì)胞表達(dá)的指標(biāo)可以做陽性細(xì)胞相關(guān)參數(shù)的分析，對(duì)于陽性為成片表達(dá)的指標(biāo)可以做陽性面積相關(guān)參數(shù)的分析。陽性細(xì)胞數(shù)量相關(guān)參數(shù)包含：各指標(biāo)陽性細(xì)胞比率、陽性細(xì)胞密度、陽性強(qiáng)度。一次分析即可獲取各指標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)量相關(guān)參數(shù)的三個(gè)數(shù)值。陽性細(xì)胞數(shù)量相關(guān)參數(shù)均可用于評(píng)價(jià)陽性強(qiáng)弱多少，可根據(jù)需求進(jìn)行選擇應(yīng)用。陽性面積相關(guān)參數(shù)包含：陽性面積比，陽性強(qiáng)度。一次分析即可獲取各指標(biāo)陽性面積相關(guān)參數(shù)的兩個(gè)數(shù)值。陽性面積相關(guān)參數(shù)均可用于評(píng)價(jià)陽性強(qiáng)弱多少，可根據(jù)需求進(jìn)行選擇應(yīng)用。

送樣運(yùn)輸要求：

1、組織樣本放置于10倍樣本體積的通用型組織固定液中固定24h以上，常溫保存運(yùn)輸石蠟包埋切片或者冰凍切片。置于固定液內(nèi)的組織切勿冷凍結(jié)冰，切勿固定時(shí)間過長。細(xì)胞爬片用通用型組織固定液固定，封口膜封好防止漏液，常溫保存運(yùn)輸。

2、石蠟切片常溫保存運(yùn)輸。冰凍切片-20°保存運(yùn)輸。

實(shí)驗(yàn)流程：

熒光二抗法：石蠟切片脫蠟至水（冰凍切片和細(xì)胞爬片無需此步）——微波抗原修復(fù)——畫圈血清封閉——孵育一抗——孵育熒光二抗（可根據(jù)需求選擇不同熒光染料標(biāo)記的二抗）——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像——數(shù)據(jù)分析。

TSA法：石蠟切片脫蠟至水（冰凍切片和細(xì)胞爬片無需此步）——微波抗原修復(fù)——畫圈雙氧水封閉——血清封閉——孵育一抗——孵育HRP二抗——孵育TSA（可根據(jù)需求選擇不同熒光染料標(biāo)記的TSA）——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像——數(shù)據(jù)分析。