服務(wù)介紹：

抗原抗體的結(jié)合非常特異。免疫熒光單標(biāo)是用與目標(biāo)蛋白對(duì)應(yīng)的特異性的第一抗體去孵育組織切片，然后再利用對(duì)應(yīng)的帶有熒光染料的第二抗體與第一抗體結(jié)合，在組織切片掃描儀或者熒光顯微鏡下用熒光染料對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)的光去激發(fā)染料發(fā)出熒光進(jìn)而將目標(biāo)蛋白通過(guò)間接標(biāo)記的方式顯示出來(lái)。也可以利用TSA技術(shù)進(jìn)行熒光標(biāo)記，有信號(hào)放大的作用。TSA技術(shù)主要原理為用HRP標(biāo)記的第二抗體與第一抗體結(jié)合后，再孵育熒光標(biāo)記的酪胺（TSA），TSA在二抗上偶聯(lián)的HRP與H₂O₂的作用下變?yōu)榛罨睦野凡⒏街谀繕?biāo)蛋白周圍的蛋白酪氨酸殘基上，在組織切片掃描儀或者熒光顯微鏡下用熒光染料對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)的光去激發(fā)染料發(fā)出熒光進(jìn)而將目標(biāo)蛋白通過(guò)間接標(biāo)記的方式顯示出來(lái)。利用TSA技術(shù)也可進(jìn)行多種蛋白同時(shí)標(biāo)記，每輪標(biāo)記都按一抗-二抗-TSA的順序?qū)ο鄳?yīng)抗原進(jìn)行標(biāo)記，每輪染色只需改變TSA熒光染料種類即可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶標(biāo)用不同熒光染料進(jìn)行共同標(biāo)記。

切片數(shù)字掃描是通過(guò)控制顯微成像系統(tǒng)和切片以一定的規(guī)則運(yùn)動(dòng)，采集多張連續(xù)的高分辨率顯微圖像再無(wú)縫拼接生成一張高分辨率的組織切片全景圖像。該圖像包含了玻片上所有的信息，可在電腦上用瀏覽軟件任意放大和縮小，任意部位觀察采圖，是真正脫離顯微鏡的閱片方式。通過(guò)在掃描儀上加載與免疫標(biāo)記時(shí)熒光染料匹配的最佳激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)的濾光塊，獲取不同熒光通道的圖像。可單通道，多通道任意組合瀏覽并按需采圖。

送樣運(yùn)輸要求：

1、組織樣本放置于10倍樣本體積的通用型組織固定液中固定24h以上，常溫保存運(yùn)輸石蠟包埋切片或者冰凍切片。置于固定液內(nèi)的組織切勿冷凍結(jié)冰，切勿固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。細(xì)胞爬片用通用型組織固定液固定，封口膜封好防止漏液，常溫保存運(yùn)輸。

2、石蠟切片常溫保存運(yùn)輸。冰凍切片-20°保存運(yùn)輸。

實(shí)驗(yàn)流程：

熒光二抗法：石蠟切片脫蠟至水（冰凍切片和細(xì)胞爬片無(wú)需此步）——微波抗原修復(fù)——畫圈血清封閉——孵育一抗——孵育熒光二抗（可根據(jù)需求選擇不同熒光染料標(biāo)記的二抗）——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像。

TSA法：石蠟切片脫蠟至水（冰凍切片和細(xì)胞爬片無(wú)需此步）——微波抗原修復(fù)——畫圈雙氧水封閉——血清封閉——孵育一抗——孵育HRP二抗——孵育TSA（可根據(jù)需求選擇不同熒光染料標(biāo)記的TSA）——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像。