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免疫熒光單標雙色（切片）

免疫熒光單標雙色（切片），服務(wù)介紹：免疫熒光單標標記即利用抗原抗體特異性結(jié)合原理，在一張切片上的一個抗原進行熒光標記，從而實現(xiàn)定位，定性，半定量的分析。實驗流程：1.石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-無水乙醇Ⅲ5min-蒸餾水洗。2.抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)......

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產(chǎn)品詳情

服務(wù)介紹：

免疫熒光單標標記即利用抗原抗體特異性結(jié)合原理，在一張切片上的一個抗原進行熒光標記，從而實現(xiàn)定位，定性，半定量的分析。

實驗流程：

1.石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-無水乙醇Ⅲ5min-蒸餾水洗。

2.抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進行抗原修復(fù)。中火8min停火8min轉(zhuǎn)中低火7min，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。(修復(fù)液和修復(fù)條件根據(jù)組織來確定）

3.畫圈：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走）

4.血清封閉:在圈內(nèi)滴加BSA孵育30min。（一抗若是山羊來源，則加驢血清）

5.加第一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）

6.加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬標記的按一定比例配好的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。

7.DAPI復(fù)染細胞核：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

8.自發(fā)熒光淬滅：切片稍甩干后，在圈內(nèi)加入自發(fā)熒光淬滅劑5min，流水沖洗10min。

9.封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

10.鏡檢拍照：切片置于掃描儀下采集圖像或熒光顯微鏡下拍照。（DAPI紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm，發(fā)藍光；FITC激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光；CY3激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光. CY5激發(fā)波長 608-648nm, 發(fā)射波長672-712。 DAPI染出來的細胞核在紫外的激發(fā)下為藍色，陽性表達為相應(yīng)熒光素標記的紅光，綠光。

送樣運輸要求：

1.冰凍切片-20℃保存和運輸

2.石蠟切片常溫運輸至實驗室。

3.細胞爬片PFA固定15min后用無菌PBS洗滌后用無菌PBS浸泡，4℃冰袋保存運輸?shù)綄嶒炇摇?

常見問題

問：細胞的運輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進行傳代操作。優(yōu)勢是省去復(fù)蘇的步驟，細胞成活率較高。2、凍存的細胞：采用干冰運輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長期存儲，擇機復(fù)蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點是需要自己復(fù)蘇。

問：為什么你們的細胞和其他公司的細胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺。也有少部分細胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶的意愿進行選擇！

問：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎？

答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細胞都需要達到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會比正常培養(yǎng)時所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細胞存活，控制生長速度，不可以用來做細胞培養(yǎng)使用。

問：培養(yǎng)細胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點是什么？

答：細胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點點，一般情況下是為貼壁的細胞或脫落的細胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細胞也會有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點。通常，白色的圓點是分散分布的，聚團類的懸浮細胞可能會聚團出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問：剛買回來的細胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶收到細胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購買原代細胞的客戶，要充分考慮該細胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對于一些能傳代次數(shù)很少的原代細胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實驗。