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EdU染色

EdU染色，服務(wù)介紹：EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物，能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子中，通過(guò)基于EdU與Apollo?熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測(cè)細(xì)胞DNA復(fù)制活性，適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面。實(shí)驗(yàn)流程：1、每孔加入100μL滲透劑(0.5%TritonX-100的PBS)脫......

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產(chǎn)品詳情

服務(wù)介紹：

EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物，能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子中，通過(guò)基于EdU與Apollo?熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測(cè)細(xì)胞DNA復(fù)制活性，適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面。

實(shí)驗(yàn)流程：

1、每孔加入100μL滲透劑(0.5% TritonX-100的PBS)脫色搖床孵育10分鐘；PBS清洗1次，5分鐘。

2、每孔加入100 μL的EDU染色反應(yīng)液（配置比例見(jiàn)下表），避光、室溫、脫色搖床孵育30分鐘后，棄染色反應(yīng)液；

3、染核：爬片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上避光晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后滴加dapi染液，或hochest染液室溫避光染核10min。

4、封片：爬片用PBS（PH7.4）洗滌3次，每次5min。爬片稍甩干后將有細(xì)胞的一面朝下用抗熒光淬滅封片劑將玻片封固在載玻片上封片。

5、鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm，發(fā)射波長(zhǎng)420nm；FITC綠光激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm，發(fā)射波長(zhǎng)515-555 nm；555紅光激發(fā)波長(zhǎng)550nm，發(fā)射波長(zhǎng)590nm）

結(jié)果判讀：DAPI染出來(lái)的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色，陽(yáng)性表達(dá)為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的紅光或者綠光　

送樣運(yùn)輸要求：

1、組織樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運(yùn)輸送樣。

2、石蠟切片常溫保存運(yùn)輸

3、冰凍切片-20℃保存運(yùn)輸

4、細(xì)胞爬片PFA固定15min后用無(wú)菌PBS洗滌后用無(wú)菌PBS浸泡，4℃冰袋保存運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室。

常見(jiàn)問(wèn)題

問(wèn)：細(xì)胞的運(yùn)輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細(xì)胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢(shì)是省去復(fù)蘇的步驟，細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞：采用干冰運(yùn)輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期存儲(chǔ)，擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢(shì)是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。

問(wèn)：為什么你們的細(xì)胞和其他公司的細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫(kù)的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺(tái)。也有少部分細(xì)胞為客戶(hù)提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶(hù)的意愿進(jìn)行選擇！

問(wèn)：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎？

答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會(huì)比正常培養(yǎng)時(shí)所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細(xì)胞存活，控制生長(zhǎng)速度，不可以用來(lái)做細(xì)胞培養(yǎng)使用。

問(wèn)：培養(yǎng)細(xì)胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點(diǎn)是什么？

答：細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn)，一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細(xì)胞也會(huì)有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常，白色的圓點(diǎn)是分散分布的，聚團(tuán)類(lèi)的懸浮細(xì)胞可能會(huì)聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問(wèn)：剛買(mǎi)回來(lái)的細(xì)胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶(hù)收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購(gòu)買(mǎi)原代細(xì)胞的客戶(hù)，要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對(duì)于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗(yàn)。