服務(wù)介紹：

抗原抗體的結(jié)合非常特異。免疫熒光雙標(biāo)是用兩種不同種屬來源的抗體共同孵育同一張組織切片，兩種抗體分別與兩種目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合，然后再用帶有不同顏色的熒光染料標(biāo)記的第二抗體分別與其對應(yīng)的第一抗體結(jié)合，在組織切片掃描儀或者熒光顯微鏡下用對應(yīng)波長的光去激發(fā)染料發(fā)出兩種不同的熒光，進(jìn)而將兩種不同目標(biāo)蛋白通過間接標(biāo)記的方式用兩種熒光顯示出來。也可以利用TSA技術(shù)進(jìn)行熒光標(biāo)記，有信號放大的作用同時(shí)可以不限制一抗的種屬，同源或異源一抗都可以標(biāo)記。TSA技術(shù)主要原理為用HRP標(biāo)記的第二抗體與第一抗體結(jié)合后，再孵育熒光標(biāo)記的酪胺（TSA），TSA在二抗上偶聯(lián)的HRP與H₂O₂的作用下變?yōu)榛罨睦野凡⒏街谀繕?biāo)蛋白周圍的蛋白酪氨酸殘基上，此結(jié)合是共價(jià)結(jié)合。而一抗與靶標(biāo)、二抗與一抗之間是非共價(jià)結(jié)合。通過高溫和微波處理，非共價(jià)結(jié)合的一抗二抗被打斷并洗脫掉，而共價(jià)結(jié)合的熒光酪胺依然附著在靶標(biāo)周圍，進(jìn)而將靶標(biāo)通過熒光標(biāo)記顯示出來。每輪標(biāo)記都按一抗-二抗-TSA的順序?qū)ο鄳?yīng)抗原進(jìn)行標(biāo)記，每輪染色只需改變TSA熒光染料種類即可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶標(biāo)用不同熒光染料進(jìn)行共同標(biāo)記。在組織切片掃描儀或者熒光顯微鏡下用熒光染料對應(yīng)波長的光去激發(fā)染料發(fā)出熒光進(jìn)而將目標(biāo)蛋白通過間接標(biāo)記的方式顯示出來。

組織芯片（細(xì)胞芯片）是將許多不同個(gè)體組織或細(xì)胞標(biāo)本以規(guī)則陣列方式排布于同一載玻片上，進(jìn)行同一指標(biāo)的原位組織學(xué)研究。客戶提供供體組織，細(xì)胞或蠟塊，在芯片制作過程中首先將供體組織，細(xì)胞包埋成單個(gè)供體蠟塊，按照客戶要求用取樣針從供體蠟塊上將目的區(qū)域的組織取出并按照客戶要求將不同的組織點(diǎn)排列在事先制作好的受體蠟塊上。然后將排列好的組織點(diǎn)與受體蠟塊進(jìn)行融合成一個(gè)蠟塊再進(jìn)行后續(xù)的切片。切出來的片子同一載玻片上包含了客戶需要同時(shí)觀察和對比的所有組織，這樣的切片用于后續(xù)進(jìn)行染色或免疫組化/熒光操作即可將載玻片上所有的組織點(diǎn)條件控制一致，這樣比一個(gè)組織一張切片操作起來更方便快捷，組織間對比更明顯結(jié)果更可靠。

切片數(shù)字掃描是通過控制顯微成像系統(tǒng)和切片以一定的規(guī)則運(yùn)動(dòng)，采集多張連續(xù)的高分辨率顯微圖像再無縫拼接生成一張高分辨率的組織切片全景圖像。該圖像包含了玻片上所有的信息，可在電腦上用瀏覽軟件任意放大和縮小，任意部位觀察采圖，是真正脫離顯微鏡的閱片方式。通過在掃描儀上加載與免疫標(biāo)記時(shí)熒光染料匹配的最佳激發(fā)波長和發(fā)射波長的濾光塊，獲取不同熒光通道的圖像。可單通道，多通道任意組合瀏覽并按需采圖。切片掃描尤其適用于芯片的瀏覽觀察和結(jié)果比較。

掃描的熒光圖像可以用軟件對陽性信號進(jìn)行半定量分析，用數(shù)據(jù)去評價(jià)陽性的強(qiáng)弱。對于陽性為單個(gè)細(xì)胞表達(dá)的指標(biāo)可以做陽性細(xì)胞相關(guān)參數(shù)的分析，對于陽性為成片表達(dá)的指標(biāo)可以做陽性面積相關(guān)參數(shù)的分析。陽性細(xì)胞數(shù)量相關(guān)參數(shù)包含：各指標(biāo)陽性細(xì)胞比率、陽性細(xì)胞密度、陽性強(qiáng)度。一次分析即可獲取各指標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)量相關(guān)參數(shù)的三個(gè)數(shù)值。陽性細(xì)胞數(shù)量相關(guān)參數(shù)均可用于評價(jià)陽性強(qiáng)弱多少，可根據(jù)需求進(jìn)行選擇應(yīng)用。陽性面積相關(guān)參數(shù)包含：陽性面積比，陽性強(qiáng)度。一次分析即可獲取各指標(biāo)陽性面積相關(guān)參數(shù)的兩個(gè)數(shù)值。陽性面積相關(guān)參數(shù)均可用于評價(jià)陽性強(qiáng)弱多少，可根據(jù)需求進(jìn)行選擇應(yīng)用。

送樣運(yùn)輸要求：

1、組織樣本放置于10倍樣本體積的通用型組織固定液中固定24h以上，常溫保存運(yùn)輸石蠟包埋。置于固定液內(nèi)的組織切勿冷凍結(jié)冰，切勿固定時(shí)間過長。

2、石蠟切片常溫保存運(yùn)輸。

實(shí)驗(yàn)流程：

熒光二抗法：石蠟切片脫蠟至水——微波抗原修復(fù)——畫圈血清封閉——同時(shí)孵育兩種異源一抗——同時(shí)孵育對應(yīng)種屬的兩種熒光二抗——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像——數(shù)據(jù)分析。

TSA法：石蠟切片脫蠟至水——微波抗原修復(fù)——畫圈雙氧水封閉——血清封閉——孵育第一種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF555-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第二種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA ——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像——數(shù)據(jù)分析。