服務(wù)介紹：

免疫熒光四標(biāo)即利用酪胺信號(hào)放大（TSA，Tyramide signal amplification）即TSA技術(shù)，在同一張切片上對(duì)四種蛋白同時(shí)進(jìn)行標(biāo)記，從而可實(shí)現(xiàn)對(duì)多種蛋白空間定位，定性及半定量分析。

TSA技術(shù)主要原理為熒光標(biāo)記的酪胺在二抗上偶聯(lián)的HRP與H₂O₂的作用下變?yōu)榛罨睦野凡⒏街诎袠?biāo)周?chē)牡鞍桌野彼釟埢希私Y(jié)合是共價(jià)結(jié)合。而一抗與靶標(biāo)、二抗與一抗之間是非共價(jià)結(jié)合。通過(guò)微波處理，非共價(jià)結(jié)合的一抗二抗被打斷并洗脫掉，而共價(jià)結(jié)合的熒光酪胺依然附著在靶標(biāo)周?chē)瑢袠?biāo)通過(guò)熒光標(biāo)記顯示出來(lái)。在檢測(cè)第二個(gè)靶標(biāo)時(shí)，相當(dāng)于全新的一輪標(biāo)記，無(wú)需考慮第二輪的抗體是否與第一輪的抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)。只需改變不同種類(lèi)熒光染料標(biāo)記TSA即可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶標(biāo)的標(biāo)記。通過(guò)多次重復(fù)免疫標(biāo)記，使用不同的熒光酪胺實(shí)現(xiàn)雙重或多重?zé)晒馊旧?

掃描的熒光圖像可以用軟件對(duì)陽(yáng)性信號(hào)進(jìn)行半定量分析，用數(shù)據(jù)去評(píng)價(jià)陽(yáng)性的強(qiáng)弱。對(duì)于陽(yáng)性為單個(gè)細(xì)胞表達(dá)的指標(biāo)可以做陽(yáng)性細(xì)胞相關(guān)參數(shù)的分析，對(duì)于陽(yáng)性為成片表達(dá)的指標(biāo)可以做陽(yáng)性面積相關(guān)參數(shù)的分析。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量相關(guān)參數(shù)包含：各指標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞比率、陽(yáng)性細(xì)胞密度、陽(yáng)性強(qiáng)度。一次分析即可獲取各指標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量相關(guān)參數(shù)的三個(gè)數(shù)值。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量相關(guān)參數(shù)均可用于評(píng)價(jià)陽(yáng)性強(qiáng)弱多少，可根據(jù)需求進(jìn)行選擇應(yīng)用。陽(yáng)性面積相關(guān)參數(shù)包含：陽(yáng)性面積比，陽(yáng)性強(qiáng)度。一次分析即可獲取各指標(biāo)陽(yáng)性面積相關(guān)參數(shù)的兩個(gè)數(shù)值。陽(yáng)性面積相關(guān)參數(shù)均可用于評(píng)價(jià)陽(yáng)性強(qiáng)弱多少，可根據(jù)需求進(jìn)行選擇應(yīng)用。

送樣運(yùn)輸要求：

1、組織樣本放置于10倍樣本體積的通用型組織固定液中固定24h以上，常溫保存運(yùn)輸石蠟包埋切片。切勿冷凍結(jié)冰，切勿固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

2、石蠟切片常溫保存運(yùn)輸。

3、熒光四標(biāo)只能做石蠟包埋切片，不能做冰凍切片和細(xì)胞爬片。

實(shí)驗(yàn)流程：

石蠟切片脫蠟至水——微波抗原修復(fù)——畫(huà)圈雙氧水封閉——血清封閉——孵育第一種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF555-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第二種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第三種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF647-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第四種一抗——孵育iF594熒光二抗——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像——數(shù)據(jù)分析。