一鍵復制產品信息
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產品詳情
服務介紹：
原位雜交與免疫熒光原理：原位雜交是指將特定標記的已知序列核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。免疫熒光就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體或抗原上，與其相應的抗原或抗體結合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應。
通過原位雜交及免疫熒光雙抗進行三標，可以在組織細胞中對核酸分子和蛋白指標同時進行共定位、以及定性分析，可以用來從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。
實驗流程：石蠟切片熒光探針原位雜交與免疫熒光雙抗三染實驗步驟
1、組織固定、脫水、切片、石蠟切片脫蠟至水。
2、消化：切片于修復液中煮沸10-15分鐘，滴加蛋白酶K消化。
3、預雜交：滴加預雜交液，37°C孵育1h。
4、雜交：傾去預雜交液，滴加含探針 雜交液, 濃度 ，恒溫箱 度雜交過夜。
5、雜交后洗滌：SSC洗滌。
6、孵育一抗、二抗：滴加一抗，4℃過夜，后PBS洗3×5min;滴加相應二抗，室溫孵育50min，PBS洗3×5min。
7、DAPI復染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min。
8、鏡檢拍照。
送樣要求：
1、切片前處理要求：新鮮組織干冰運輸后做冰凍切片；或取2mm左右厚度的新鮮組織，5min內投入原位雜交固定液內固定，4℃低溫保存運輸，切勿冷凍結冰，盡快包埋切片后進行原位雜交實驗，固定時間過長影響核酸檢出率；
2、冰凍切片：冰凍切片-20℃運輸；
3、石蠟切片：石蠟切片常溫運輸；
4、細胞爬片：細胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，換無酶PBS，密封，4℃運輸。
常見問題
答：公司提供兩種運輸方式供老師選擇，1、復蘇的活細胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進行傳代操作。優(yōu)勢是省去復蘇的步驟，細胞成活率較高。2、凍存的細胞：采用干冰運輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過夜，第二天轉入液氮長期存儲，擇機復蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點是需要自己復蘇。
答：我公司提供的細胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺。也有少部分細胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案，根據客戶的意愿進行選擇！
答：不可以重復使用，一般從我公司發(fā)出的細胞都需要達到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會比正常培養(yǎng)時所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細胞存活，控制生長速度，不可以用來做細胞培養(yǎng)使用。
答：細胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點點，一般情況下是為貼壁的細胞或脫落的細胞死亡后的產物，懸浮細胞也會有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點。通常，白色的圓點是分散分布的，聚團類的懸浮細胞可能會聚團出現(xiàn)白色的亮斑，技術老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。
答：一般情況下，我公司建議客戶收到細胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細胞數量多一些，便于后期復蘇。購買原代細胞的客戶，要充分考慮該細胞的傳代次數限制，人源原代細胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對于一些能傳代次數很少的原代細胞，不建議凍存，收到后調整狀態(tài)后即可安排實驗。
皖公網安備 34010402703761號
方經理：355185756
