一、細(xì)胞簡介

細(xì)胞描述

該細(xì)胞是Arvanitakis L等人于1995年人胸膜積液分離獲得的 B淋巴細(xì)胞。該細(xì)胞復(fù)蘇后需要一到兩周左右才恢復(fù)正常生長。

細(xì)胞名稱

BC-3 人淋巴瘤細(xì)胞

細(xì)胞別稱

BC-3

細(xì)胞貨號

Delf-27178

來源

人 男性 胸膜積液

細(xì)胞形態(tài)

淋巴母細(xì)胞

生長特性

懸浮生長

培養(yǎng)條件

準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清20%；雙抗1%。

注意事項(xiàng)：該細(xì)胞復(fù)蘇后成活率較低，會出現(xiàn)大量死細(xì)胞碎片，培養(yǎng)一到兩周后有所好轉(zhuǎn)。運(yùn)輸途中會出現(xiàn)死細(xì)胞和細(xì)胞碎片，收到郵寄的活細(xì)胞的用戶若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物內(nèi)有黑色顆粒物及細(xì)胞碎片，此為正常現(xiàn)象。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

傳代周期：保持活細(xì)胞密度在5x10^5~ 2x10^6 /ml之間，不可過密或過稀 換液頻率：每周2-3次

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法（懸浮細(xì)胞）

傳代比例

1:2（不同細(xì)胞情況具體對待）

傳代方法

1、當(dāng)細(xì)胞量達(dá)到 8-10×10⁵cell/ml 時，可進(jìn)行傳代；

2、在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的細(xì)胞懸液至離心管中；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、準(zhǔn)備兩個新的T-25 培養(yǎng)瓶。向細(xì)胞沉淀加入完全培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為2-4×10⁵cell/ml，均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶中，每瓶約6-8ml；

5、水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

注意事項(xiàng)

注意收集懸浮的細(xì)胞

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

凍存規(guī)格

建議每瓶T25瓶凍存1支。

凍存方法

1、待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，即可進(jìn)行細(xì)胞凍存；

2、收集細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、加入細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞沉淀，調(diào)整細(xì)胞密度為2×10⁶ cell/ml，輕輕混勻后，將細(xì)胞懸液加入凍存管，1ml/支。

5、將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

6、次日取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存；

五、注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

1、所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。