一、細胞基本屬性
1、細胞種屬：粉紋夜蛾

2、生長情況：半貼壁
3、培養(yǎng)條件：Grace’s Insect Medium+10%FBS+1%雙抗

3、培養(yǎng)環(huán)境：air, 100%；28℃

二、細胞培養(yǎng)操作
1、換液周期：2-3天

2、培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
3、傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

三、傳代方法
1. 輕輕吸走培養(yǎng)上清，留2-3ml培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面吹下細胞；
2. 混勻細胞，收集細胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；
3. 加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
4. 補足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
半貼壁細胞會附著瓶底，但貼壁不緊，輕輕吸取培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面就會脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細胞操作，吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。

四、細胞凍存操作
1、凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
2、凍存規(guī)格：200-300萬/ml，1ml每管

五、凍存方法
1. 離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2. 將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
4.注意事項：凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案

六、收貨處理方式

Tips：

1. 細胞半貼壁圓形或多角形生長，部分懸浮圓形，傳代時均可收集培養(yǎng)，換液時將懸浮細胞離心收集后重新接回原瓶，若貼壁細胞較多活性較好時可以不要懸浮的細胞；

2. 該細胞對胰酶比較敏感，胰酶消化后細胞形態(tài)會更多梭形，貼壁變緊，傳代不建議使用胰酶消化該細胞；

3. 該細胞28度培養(yǎng)，建議27.5-28度之間，超過28度細胞狀態(tài)會受損無法恢復(fù)，低于27度細胞生長速度會變慢，但恢復(fù)溫度后可以恢復(fù)生長。

注意事項：

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

使用范圍

本公司產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。