產(chǎn)品簡介

本試劑盒設(shè)計用于從血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)液上清、病毒原液及感染病毒的組織中快速分離各種病毒DNA/RNA。通過本公司自主研發(fā)的超順磁性磁珠，在特殊的緩沖體系作用下，核酸特異的吸附于磁性粒子表面，蛋白、細胞碎片以及其他污染物可有效的被漂洗，最后用Nuclease-free Water洗脫得到高質(zhì)量的DNA/RNA。得到的高質(zhì)量DNA/RNA可直接進行下游PCR、cDNA合成、RT-qPCR等分子生物學(xué)實驗。

儲存與運輸

Proteinase K和Carrier RNA冰袋（wet ice）運輸，-20℃保存；其余試劑室溫運輸，室溫儲存；有效期12個月。

組成

使用前準備

1. Buffer MVL和Buffer MPA如有沉淀現(xiàn)象，請于37℃加熱溶解，待恢復(fù)室溫后使用。

2. 首次使用前請向Buffer MPA中加入18 mL的無水乙醇，Buffer MPB中加入60 mL的無水乙醇。

3. 首次使用前可先將Carrier RNA分裝后于-20℃保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融。

4. 使用組織研磨儀時，提前將研磨儀預(yù)冷。

5. 自備磁力架。

實驗步驟

1. 病毒樣本的處理：

a) 血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)液上清和病毒原液的裂解：取10-200 μL的血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)液上清或病毒原液，起始量不足200 μL可用PBS或Nuclease-free Water補至200 μL。

b) 感染病毒的組織裂解：取10-20 mg新鮮或超低溫凍存的感染病毒的組織，置于裝有2-3顆3 mm研磨珠的1.5 mL Nuclease-free離心管或?qū)Ｓ醚心ス苤校⒖虒⒀b有組織的離心管或研磨管置于液氮中，隨后使用組織研磨儀在低溫條件下將組織徹底研磨至勻漿狀（如果組織沒有被徹底勻漿，將會影響DNA/RNA的得率和質(zhì)量），研磨后加入200 μL的PBS或Nuclease-free Water。

2. 加入200 μL Buffer MVL，20 μL Proteinase K和1 μL Carrier RNA，充分混勻后于56℃孵育10 min;

3. 加入200 μL無水乙醇，顛倒混勻，再加入20 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需渦旋至分散均勻），上下顛倒數(shù)次，至磁珠分散均勻；

4. 室溫放置10 min，期間使用移液器或渦旋儀混勻2-3次，至磁珠分散均勻；

5. 將離心管移至磁力架上靜置30 s，直至磁珠完全吸附，將離心管隨磁力架溫和地上下顛倒數(shù)次，使管壁殘留的磁珠沖刷下來，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，請勿將磁珠吸出）；

6. 移開磁力架，加入500 μL Buffer MPA，使用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻，將離心管移至磁力架上靜置30 s，再將離心管隨磁力架溫和地上下顛倒數(shù)次，使管壁殘留的磁珠和鹽分沖刷下來，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，請務(wù)必吸盡離心管內(nèi)殘留的液體）；

7. 移開磁力架，加入700 μL Buffer MPB，使用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻，將離心管移至磁力架上靜置30 s，再將離心管隨磁力架溫和地上下顛倒數(shù)次，使管壁殘留的磁珠和鹽分沖刷下來，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，請務(wù)必吸盡離心管內(nèi)殘留的液體）；

8. 重復(fù)操作步驟7；

9. 將離心管蓋打開，室溫放置5–10 min，使乙醇完全揮發(fā)（避免磁珠過度干燥，以免影響核酸得率）；

10. 移開磁力架，向離心管中加入50-80 μL Nuclease-free Water，用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻，室溫靜置3 min；

11. 將離心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的Nuclease-free離心管中，即得高純度的DNA/RNA。

注意事項

1. 操作之前，請務(wù)必認真閱讀本產(chǎn)品說明書。

2. 由于提取過程中加入了Carrier RNA，不能通過電泳或吸光度計測定定量。

3. 本試劑盒提供的Carrier RNA是大腸桿菌來源的RNA，主要是為了提高微量核酸的回收效率與防止得到的微量RNA被降解，如果PCR擴增引物與Carrier RNA具有較高同源性時，可重新設(shè)計引物。

4. 磁珠易沉淀，使用前應(yīng)渦旋至磁珠分散均勻。

5. 磁珠懸液在保存過程中避免冷凍。

6. 向樣本中加入磁珠前，需要將樣本與其他試劑混合均勻。

7. 洗脫前，應(yīng)使乙醇完全揮發(fā)，避免殘留的乙醇影響下游實驗。

8. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。