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CCK-8高靈敏快速檢測(cè)試劑盒

目錄價(jià) ￥ 480.00 一鍵復(fù)制產(chǎn)品信息

貨號(hào)Delf-28770

規(guī)格 5mL

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400-1016-218
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355185756@qq.com
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安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號(hào)合肥國家大學(xué)科技園A401室

產(chǎn)品詳情

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

CCK-8高靈敏快速檢測(cè)試劑盒，簡(jiǎn)稱CCK-8 plus，是一種廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測(cè)試劑盒。其檢測(cè)原理在于，在電子耦合試劑存在的情況下，溶液中的WST-8化合物被活細(xì)胞內(nèi)脫氫酶還原成具有水溶性的橙黃色甲臜化合物，該物質(zhì)在450 nm處有最大吸收峰。甲臜量與活細(xì)胞數(shù)成正比，即細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

本試劑盒在常規(guī)CCK-8試劑盒基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化，僅需0.5至1小時(shí)即可完成檢測(cè)，檢測(cè)速度更快、靈敏度更高、線性范圍更寬。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

冰袋（wet ice）運(yùn)輸；2-8℃保存12個(gè)月有效；長期不用也可-20℃保存，24個(gè)月有效；建議避光保存。

組成

Component	Delf-28770-1ML	Delf-28770-5ML
CCK-8高靈敏快速檢測(cè)試劑盒	1 mL	5 mL
說明書	1份

操作步驟

細(xì)胞活力/增殖/毒性檢測(cè)

1. 在96孔板中接種一定數(shù)量的細(xì)胞懸液100 μL，于培養(yǎng)箱（37℃，5% CO₂）預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)。

2. 向培養(yǎng)板加入不同濃度的待測(cè)物質(zhì)，孵育適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（如：6、12、24、48或72小時(shí)）。

3. 向每孔加入10 μL CCK-8 plus試劑（注意不要在孔中產(chǎn)生氣泡，它會(huì)影響吸光值）。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8 plus之前更換新鮮培養(yǎng)基，以去掉藥物影響。

4. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育0.5-2小時(shí)（對(duì)于大多數(shù)情況孵育0.5-1小時(shí)左右就可以了。時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在0.5、1、1.5、2和3小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)）。

5. 用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度（可以使用大于600nm的波長，例如650nm，作為參考波長進(jìn)行雙波長測(cè)定）。

6. 如果暫時(shí)不檢測(cè)OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的 HCl 或者1% SDS (W/V)溶液，避光保存在4℃條件，在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

活力計(jì)算：

細(xì)胞活力（％）=[A(實(shí)驗(yàn)孔)－A(空白孔)]／[A(對(duì)照孔)－A(空白孔)]×100%

細(xì)胞抑制率（％）=[A(對(duì)照孔)－A(實(shí)驗(yàn)孔)]／[A(對(duì)照孔)－A(空白孔)]×100%

A（實(shí)驗(yàn)孔）：含細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白孔）：含培養(yǎng)基、CCK-8溶液、藥物，而沒有細(xì)胞的孔的吸光度

A（對(duì)照組）：含細(xì)胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

注意事項(xiàng)

1. 本試劑盒檢測(cè)原理是依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，樣品中如有較多還原劑(例如一些抗氧化劑)會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)法去除。

2. 大多數(shù)情況下，CCK-8高靈敏快速檢測(cè)試劑加入細(xì)胞后僅需孵育0.5-1小時(shí)就可以獲得理想的信號(hào)值，但不同的細(xì)胞類型和細(xì)胞密度等實(shí)驗(yàn)條件下，所需的孵育時(shí)間可能存在一定的差別。

3. 如果沒有450 nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm檢測(cè)靈敏度最高。

4. 培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。

5. 加檢測(cè)試劑時(shí)避免產(chǎn)生氣泡，否則會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。

6. 當(dāng)試劑從-20℃解凍時(shí)，建議4℃或者常溫解凍，不建議37℃解凍。可分裝保存，避免反復(fù)凍融。

7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！

常見問題

問：細(xì)胞的運(yùn)輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細(xì)胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢(shì)是省去復(fù)蘇的步驟，細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞：采用干冰運(yùn)輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長期存儲(chǔ)，擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢(shì)是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。

問：為什么你們的細(xì)胞和其他公司的細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺(tái)。也有少部分細(xì)胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶的意愿進(jìn)行選擇！

問：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎？

答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會(huì)比正常培養(yǎng)時(shí)所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細(xì)胞存活，控制生長速度，不可以用來做細(xì)胞培養(yǎng)使用。

問：培養(yǎng)細(xì)胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點(diǎn)是什么？

答：細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn)，一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細(xì)胞也會(huì)有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常，白色的圓點(diǎn)是分散分布的，聚團(tuán)類的懸浮細(xì)胞可能會(huì)聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問：剛買回來的細(xì)胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購買原代細(xì)胞的客戶，要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對(duì)于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗(yàn)。