吉姆薩染色
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¥ 0.00
一鍵復(fù)制產(chǎn)品信息
產(chǎn)品推薦
聯(lián)系方式
- 電話:400-1016-218
- 郵箱:355185756@qq.com
- 地址:安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號(hào)合肥國家大學(xué)科技園A401室
產(chǎn)品詳情
服務(wù)介紹:
組織切片及細(xì)胞涂片經(jīng)吉姆薩染色后,各類細(xì)胞由于其成份的差異而呈現(xiàn)出不同的著色,從而達(dá)到分辨各類細(xì)胞的目的。本項(xiàng)目為改良吉姆薩染色,適用于血涂片,肺泡灌洗液細(xì)胞滴片,骨髓細(xì)胞涂片,石蠟切片和冰凍切片的染色,染色目的多為觀察各類炎性細(xì)胞的特征及數(shù)量分布。
實(shí)驗(yàn)流程:
涂片/組織切片-改良吉姆薩染色-脫水封片-顯微鏡鏡檢
結(jié)果判讀:
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細(xì)胞類型 |
細(xì)胞特征及染色結(jié)果 |
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成熟紅細(xì)胞 |
圓餅狀,粉紅色,無核 |
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中性粒細(xì)胞 |
細(xì)胞核藍(lán)色,呈馬蹄形,桿狀或分葉形;胞質(zhì)淡紫紅色 |
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嗜酸性顆粒 |
細(xì)胞核藍(lán)色,呈馬蹄形,桿狀或分葉形;胞質(zhì)內(nèi)深紅色顆粒 |
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嗜堿性粒細(xì)胞 |
細(xì)胞核藍(lán)色,呈馬蹄形,桿狀或分葉形;胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)紫色顆粒 |
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淋巴細(xì)胞 |
細(xì)胞較小,核藍(lán)色小而圓;細(xì)胞質(zhì)較少呈藍(lán)紫色 |
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單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞 |
細(xì)胞較大,細(xì)胞核藍(lán)色大而圓;細(xì)胞質(zhì)淺藍(lán)紫色 |
樣本準(zhǔn)備方法及送樣運(yùn)輸要求(為保證染色成功率,血液、肺泡灌洗液、骨髓樣本建議客戶按以下方法自行涂片固定后送樣):
一、涂片的制作方法:
1血涂片制備:
(1)取新鮮血液(若用抗凝管收集的血液,放置最好不要超過24h,否則血液中白細(xì)胞的數(shù)量以及種類會(huì)明顯減少),選用干凈的粘附玻片,用移液槍吸取10ul的血液,滴加在玻片的一側(cè)(一般都是磨砂對(duì)側(cè))。
(2)再取一片輔助玻片(也可選用蓋玻片,依據(jù)個(gè)人手的力道習(xí)慣選擇),以45°角將其寬邊靠近血液,血液沿著接觸邊緣向兩邊暈開,當(dāng)兩邊都到達(dá)邊緣時(shí),輕輕地穩(wěn)健且勻速地推向磨砂面一側(cè),進(jìn)行涂片,然后快速果斷地拿走載玻片。可見涂片首尾分明,厚薄均勻。(一般情況下,涂抹速度力道適中的話,取走玻片時(shí)載玻片上的血幾乎無殘留,且涂抹出的血涂片無明顯細(xì)胞破碎,變形。在顯微鏡下可觀察到細(xì)胞呈單個(gè)緊密排列,整體比較均勻。)
(3)自然晾干后,用甲醇浸泡固定15min,自然晾干后4℃保存運(yùn)輸。
2 肺泡灌洗液和骨髓涂片制備:
(1)取細(xì)胞懸液,2800r 4℃離心5min去上清。若沉淀紅色較多,則需要用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞。細(xì)胞沉淀加入紅細(xì)胞裂解液200ul,渦旋混勻,放在冰上裂解2min后加入1ml PBS終止裂解。2800r 4℃離心5min去上清后加PBS重懸。若沉淀紅色不多,則不需要裂解紅細(xì)胞,直接棄上清液,加PBS重懸。根據(jù)細(xì)胞沉淀量對(duì)應(yīng)加入PBS:
①若肉眼觀察無明顯細(xì)胞沉淀,直接加入50ul PBS,用移液槍吹打混勻后,涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的小圓圈中(3cm×2cm的橢圓);
②若細(xì)胞沉淀量為綠豆大小,加入200ul PBS,用移液槍吹打混勻后,吸取50ul,涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的小圓圈中(3cm×2cm的橢圓);
③若細(xì)胞沉淀量很多,黃豆大小或更大,加入1ml PBS,用移液槍吹打混勻后,吸取150ul,涂于粘附載玻片上提前用組化筆畫好的大圓圈中(最大長邊約5cm,最大短邊約2cm的橢圓)。在顯微鏡下觀察細(xì)胞量的多少,若還是過厚,再用PBS對(duì)倍稀釋該細(xì)胞懸液,直至在顯微鏡下觀察到細(xì)胞量涂布均勻。
(2)用移液槍將細(xì)胞懸液鋪滿整個(gè)圓圈,涂片放置自然晾干(因細(xì)胞未經(jīng)固定,不可通過烘箱加快晾干)。
(3)將晾干后的涂片放入丙酮中浸泡固定1min,自然風(fēng)干,4℃保存運(yùn)輸。
3.石蠟切片常溫運(yùn)輸,冰凍切片-20℃運(yùn)輸。
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樣本種類 |
預(yù)處理過程 |
固定條件 |
保存運(yùn)輸條件 |
備注 |
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血液 |
5-10ul血液涂片 |
甲醇固定15min后自然晾干 |
4℃保存運(yùn)輸 |
血液要用抗凝管采集,取血后立即涂片固定 |
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肺泡灌洗液,骨髓 |
50-150ul細(xì)胞懸浮液涂片 |
丙酮固定1min后自然晾干 |
4℃保存運(yùn)輸 |
樣品中紅細(xì)胞較多需要裂解紅細(xì)胞,取樣后立即涂片固定 |
常見問題
答:公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇,1、復(fù)蘇的活細(xì)胞:采用常溫發(fā)貨的方式,收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢是省去復(fù)蘇的步驟,細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞:采用干冰運(yùn)輸,一般情況下發(fā)貨是2支凍存管,收到后放-80過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮長期存儲(chǔ),擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快,一般一兩天即可收到,缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。
答:我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息,如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺(tái)。也有少部分細(xì)胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案,根據(jù)客戶的意愿進(jìn)行選擇!
答:不可以重復(fù)使用,一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出,充液的培養(yǎng)基血清比例會(huì)比正常培養(yǎng)時(shí)所用到的培養(yǎng)液低很多,通常在3-5%,以維持細(xì)胞存活,控制生長速度,不可以用來做細(xì)胞培養(yǎng)使用。
答:細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn),一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物,懸浮細(xì)胞也會(huì)有這種現(xiàn)象,出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常,白色的圓點(diǎn)是分散分布的,聚團(tuán)類的懸浮細(xì)胞可能會(huì)聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑,技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。
答:一般情況下,我公司建議客戶收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種,可先凍存1-2支凍存管,凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些,便于后期復(fù)蘇。購買原代細(xì)胞的客戶,要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制,人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右,鼠源的可以傳3代左右,對(duì)于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞,不建議凍存,收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗(yàn)。













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