TRAP染色
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一鍵復(fù)制產(chǎn)品信息
產(chǎn)品推薦
聯(lián)系方式
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- 地址:安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號合肥國家大學(xué)科技園A401室
產(chǎn)品詳情
服務(wù)介紹:
抗酒石酸酸性磷酸酶染色,又稱Trap染色,是用于檢測骨、骨細胞中破骨細胞的染色,使破骨細胞呈紅色,細胞核淺藍色,用以顯示破骨細胞的分布及數(shù)量變化。
實驗流程:
脫蠟至水—染液配制-Trap染色-蘇木素淺染核-脫水封片-顯微鏡鏡檢。
1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自來水洗,蒸餾水洗三遍。
2、工作液配制:
Trap孵育液配制:
注:將TRAP染液B與TRAP染液C等比例混合,現(xiàn)配現(xiàn)用。標(biāo)記為B液備用。
將TRAP染液D 20mg用TRAP染液E 1mL溶解,標(biāo)記為C液備用(C液需提前至少3天配置)。
Trap孵育液配制:TRAP染液A 18mL+B液 1mL+C液 1mL混勻,再加TRAP染液F 0.282g,充分溶解過濾后備用即為TRAP孵育液。
3、孵育染色:將切片用組畫筆化圈后放在(加有一定量的防止切片蒸干的純水)濕盒中,用蒸餾水37℃孵育2h,傾去蒸餾水,將切片重新放置在濕盒中,并滴加過濾好的現(xiàn)配的trap孵育液放于37℃烤箱孵育20min。
4、蘇木素染色:傾去染液,水洗后,蘇木素染液復(fù)染核15s,分化液分化,返藍液返藍。
5、脫水封片:常規(guī)脫水,透明,中性樹膠封片。
6、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。
結(jié)果判讀:
破骨細胞呈酒紅色或淺紅色,細胞核呈淺藍色
送樣運輸要求:
1.樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上,常溫運輸送樣。切勿固定時間過長,切勿冷凍結(jié)冰。
2.石蠟切片常溫運輸。
常見問題
答:公司提供兩種運輸方式供老師選擇,1、復(fù)蘇的活細胞:采用常溫發(fā)貨的方式,收到即可觀察密度并判斷是否進行傳代操作。優(yōu)勢是省去復(fù)蘇的步驟,細胞成活率較高。2、凍存的細胞:采用干冰運輸,一般情況下發(fā)貨是2支凍存管,收到后放-80過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮長期存儲,擇機復(fù)蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快,一般一兩天即可收到,缺點是需要自己復(fù)蘇。
答:我公司提供的細胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息,如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺。也有少部分細胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案,根據(jù)客戶的意愿進行選擇!
答:不可以重復(fù)使用,一般從我公司發(fā)出的細胞都需要達到一定的密度后發(fā)出,充液的培養(yǎng)基血清比例會比正常培養(yǎng)時所用到的培養(yǎng)液低很多,通常在3-5%,以維持細胞存活,控制生長速度,不可以用來做細胞培養(yǎng)使用。
答:細胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點點,一般情況下是為貼壁的細胞或脫落的細胞死亡后的產(chǎn)物,懸浮細胞也會有這種現(xiàn)象,出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點。通常,白色的圓點是分散分布的,聚團類的懸浮細胞可能會聚團出現(xiàn)白色的亮斑,技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。
答:一般情況下,我公司建議客戶收到細胞后傳1-2代后即可安排凍存留種,可先凍存1-2支凍存管,凍存的細胞數(shù)量多一些,便于后期復(fù)蘇。購買原代細胞的客戶,要充分考慮該細胞的傳代次數(shù)限制,人源原代細胞大概可以傳7代左右,鼠源的可以傳3代左右,對于一些能傳代次數(shù)很少的原代細胞,不建議凍存,收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實驗。














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