服務介紹：

抗原抗體的結合非常特異。免疫熒光雙標是用兩種不同種屬來源的抗體共同孵育同一張組織切片，兩種抗體分別與兩種目標蛋白特異性結合，然后再用帶有不同顏色的熒光染料標記的第二抗體分別與其對應的第一抗體結合，在組織切片掃描儀或者熒光顯微鏡下用對應波長的光去激發(fā)染料發(fā)出兩種不同的熒光，進而將兩種不同目標蛋白通過間接標記的方式用兩種熒光顯示出來。也可以利用TSA技術進行熒光標記，有信號放大的作用同時可以不限制一抗的種屬，同源或異源一抗都可以標記。TSA技術主要原理為用HRP標記的第二抗體與第一抗體結合后，再孵育熒光標記的酪胺（TSA），TSA在二抗上偶聯(lián)的HRP與H₂O₂的作用下變?yōu)榛罨睦野凡⒏街谀繕说鞍字車牡鞍桌野彼釟埢希私Y合是共價結合。而一抗與靶標、二抗與一抗之間是非共價結合。通過高溫和微波處理，非共價結合的一抗二抗被打斷并洗脫掉，而共價結合的熒光酪胺依然附著在靶標周圍，進而將靶標通過熒光標記顯示出來。每輪標記都按一抗-二抗-TSA的順序對相應抗原進行標記，每輪染色只需改變TSA熒光染料種類即可實現(xiàn)多個靶標用不同熒光染料進行共同標記。在組織切片掃描儀或者熒光顯微鏡下用熒光染料對應波長的光去激發(fā)染料發(fā)出熒光進而將目標蛋白通過間接標記的方式顯示出來。

切片數(shù)字掃描是通過控制顯微成像系統(tǒng)和切片以一定的規(guī)則運動，采集多張連續(xù)的高分辨率顯微圖像再無縫拼接生成一張高分辨率的組織切片全景圖像。該圖像包含了玻片上所有的信息，可在電腦上用瀏覽軟件任意放大和縮小，任意部位觀察采圖，是真正脫離顯微鏡的閱片方式。通過在掃描儀上加載與免疫標記時熒光染料匹配的最佳激發(fā)波長和發(fā)射波長的濾光塊，獲取不同熒光通道的圖像。可單通道，多通道任意組合瀏覽并按需采圖。

送樣運輸要求：

1、組織樣本放置于10倍樣本體積的通用型組織固定液中固定24h以上，常溫保存運輸石蠟包埋切片或者冰凍切片。置于固定液內的組織切勿冷凍結冰，切勿固定時間過長。細胞爬片用通用型組織固定液固定，封口膜封好防止漏液，常溫保存運輸。

2、石蠟切片常溫保存運輸。冰凍切片-20°保存運輸。

實驗流程：

熒光二抗法：石蠟切片脫蠟至水（冰凍切片和細胞爬片無需此步）——微波抗原修復——畫圈血清封閉——同時孵育兩種異源一抗——同時孵育對應種屬的兩種熒光二抗——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像。

TSA法：石蠟切片脫蠟至水（冰凍切片和細胞爬片無需此步）——微波抗原修復——畫圈雙氧水封閉——血清封閉——孵育第一種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF555-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第二種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA ——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像。