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      • 免疫電鏡單標標記
      • 免疫電鏡單標標記

      免疫電鏡單標標記

      目錄價 ¥ 0.00 一鍵復制產(chǎn)品信息

      免疫電鏡單標標記,項目介紹:免疫電鏡是利用抗原抗體特異性結合原理,在一張超薄切片(鎳網(wǎng))上,用特異性一抗與待檢測抗原結合,然后用帶有膠體金標記的二抗與一抗抗原復合物結合。在電子顯微鏡下膠體金為黑色顆粒狀物質,在組織和細胞超微結構上清楚定位抗原,實現(xiàn)蛋白于亞細胞水平的定位,如線粒體、內質網(wǎng)等。樣本準備:將可孵育抗體的超薄切片,撈于鎳網(wǎng),干燥后送樣。實驗步驟:免疫標記:①復溫水合:鎳網(wǎng)從4℃取出用超純水懸浮5min;②......
      文獻征集
      產(chǎn)品詳情

      項目介紹:

      免疫電鏡是利用抗原抗體特異性結合原理,在一張超薄切片(鎳網(wǎng))上,用特異性一抗與待檢測抗原結合,然后用帶有膠體金標記的二抗與一抗抗原復合物結合。在電子顯微鏡下膠體金為黑色顆粒狀物質,在組織和細胞超微結構上清楚定位抗原,實現(xiàn)蛋白于亞細胞水平的定位,如線粒體、內質網(wǎng)等。


      樣本準備:

      將可孵育抗體的超薄切片,撈于鎳網(wǎng),干燥后送樣。


      實驗步驟:

      免疫標記:

      ①復溫水合:鎳網(wǎng)從4℃取出用超純水懸浮5min;

      ②清洗:TBS室溫清洗3次,每次5min;

      ③封閉:1%BSA/TBS的封閉液室溫封閉30min;

      ④加一抗:抗體與封閉液按一定稀釋比稀釋后4℃過夜孵育;

      ⑤清洗:室溫復溫后,TBS清洗3次,每次5min;

      ⑥加二抗:二抗與二抗稀釋液按一定稀釋比稀釋,先室溫孵育20min,后轉37℃烘箱孵育1h,然后轉室溫復溫0.5h。實驗過程中防止干片。

      ⑦清洗:TBS清洗5次,每次5min后,超純水清洗5次,每次5min。

      ⑧鈾復染:鎳網(wǎng)于2%醋酸鈾飽和酒精溶液避光染色8min;70%酒精清洗3次;超純水清洗3次。

      ⑨烘干:清洗后的鎳網(wǎng)用濾紙吸干后放入網(wǎng)板中,37℃烘箱放置10min烘干備用。


      備注:

      1、如果公司無抗體,需要客戶自己提供抗體。市面上抗體大多未進行免疫電鏡標記驗證,標記效果不確定。未標記成功收取一半費用。

      2、如果客戶使用本公司一抗,需額外收取一抗抗體使用費130元/張。

      常見問題
      問:細胞的運輸方式有哪些?有什么區(qū)別?

      答:公司提供兩種運輸方式供老師選擇,1、復蘇的活細胞:采用常溫發(fā)貨的方式,收到即可觀察密度并判斷是否進行傳代操作。優(yōu)勢是省去復蘇的步驟,細胞成活率較高。2、凍存的細胞:采用干冰運輸,一般情況下發(fā)貨是2支凍存管,收到后放-80過夜,第二天轉入液氮長期存儲,擇機復蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快,一般一兩天即可收到,缺點是需要自己復蘇。

      問:為什么你們的細胞和其他公司的細胞培養(yǎng)條件不一樣?

      答:我公司提供的細胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息,如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺。也有少部分細胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案,根據(jù)客戶的意愿進行選擇!

      問:培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復使用嗎?

      答:不可以重復使用,一般從我公司發(fā)出的細胞都需要達到一定的密度后發(fā)出,充液的培養(yǎng)基血清比例會比正常培養(yǎng)時所用到的培養(yǎng)液低很多,通常在3-5%,以維持細胞存活,控制生長速度,不可以用來做細胞培養(yǎng)使用。

      問:培養(yǎng)細胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點是什么?

      答:細胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點點,一般情況下是為貼壁的細胞或脫落的細胞死亡后的產(chǎn)物,懸浮細胞也會有這種現(xiàn)象,出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點。通常,白色的圓點是分散分布的,聚團類的懸浮細胞可能會聚團出現(xiàn)白色的亮斑,技術老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

      問:剛買回來的細胞如何凍存留種呢?

      答:一般情況下,我公司建議客戶收到細胞后傳1-2代后即可安排凍存留種,可先凍存1-2支凍存管,凍存的細胞數(shù)量多一些,便于后期復蘇。購買原代細胞的客戶,要充分考慮該細胞的傳代次數(shù)限制,人源原代細胞大概可以傳7代左右,鼠源的可以傳3代左右,對于一些能傳代次數(shù)很少的原代細胞,不建議凍存,收到后調整狀態(tài)后即可安排實驗。

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