細(xì)胞介紹

K562/ADR為由K562細(xì)胞構(gòu)建的耐ADR藥物細(xì)胞株。

細(xì)胞特性

1）來源：人慢性髓系白血病細(xì)胞耐藥篩選

2）形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣；圓形，懸浮生長(zhǎng)

3）含量：>1×10⁶細(xì)胞數(shù)

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存：干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞有污染；或凍存管有破損，融化、漏液等，請(qǐng)立即拍照并聯(lián)系我們。照片包括細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管外觀，顯微鏡下細(xì)胞照片（100倍，200倍各2張）；

2、復(fù)蘇細(xì)胞的充液培養(yǎng)基為不含藥物的維持培養(yǎng)基，血清濃度較低，收到細(xì)胞后請(qǐng)及時(shí)更換為完全培養(yǎng)基；

3、建議收到細(xì)胞后，首先進(jìn)行擴(kuò)增（至少3代），并凍存部分細(xì)胞以備用。

4、初次培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)8×10⁵個(gè)/mL時(shí)，可加入500ng/mL ADR的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞細(xì)胞密度達(dá)1×10⁶個(gè)/mL后傳代。細(xì)胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至1ug/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過程中細(xì)胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度達(dá)8×10⁵個(gè)/mL，且生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的ADR藥物濃度。

5、細(xì)胞凍存過程中，不可添加藥物。

細(xì)胞培養(yǎng)試劑的配制

1）ADR藥物的配制及保存

建議將ADR藥物配制成1mg/mL的母液，即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR藥物，使其完全溶解后，使用0.22um濾器過濾除菌。

注意：可根據(jù)用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致藥物失效。溶解后的ADR，4℃保存1周，-20℃保存1個(gè)月，-80℃保存6個(gè)月。

2）凍存液的配制

90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。（凍存液中不含藥物）

3）完全培養(yǎng)基的配制

細(xì)胞培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%~80%。

細(xì)胞處理

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

注意：①細(xì)胞復(fù)蘇過程中，不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細(xì)胞密度達(dá)約8×105個(gè)/mL時(shí)，方可添加500ng/mL ADR藥物；若細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為緩慢，可適當(dāng)降低ADR的濃度（首次降低一半藥物濃度），或使用不含ADR的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的ADR濃度。

②建議復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸，造成人員傷害。

2）細(xì)胞傳代（建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1：2比例傳代）

懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×10⁵~1×10⁶個(gè)/mL，可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

注意：細(xì)胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至1ug/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過程中細(xì)胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約8×10⁵個(gè)/mL，且生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的ADR藥物濃度。

3）細(xì)胞凍存

①細(xì)胞凍存時(shí)，收集細(xì)胞懸液到離心管中，1000rpm，離心5min，棄去上清。

②細(xì)胞計(jì)數(shù)后，加入配制好的細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，按照1×10⁶ ~ 1×10⁷個(gè)細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

注意：細(xì)胞凍存過程中，不可添加藥物。

③將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

使用范圍

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。