產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

本產(chǎn)品是一種適用于人外周血淋巴細(xì)胞分離的梯度密度分離液，也適用于大多數(shù)哺乳動物單個(gè)核細(xì)胞分離，其原理主要是根據(jù)外周血不同細(xì)胞之間的密度差異（紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度大約為1.090 g/mL；血小板密度1.030-1.035 g/mL；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度1.075-1.090 g/mL），通過梯度密度離心，將淋巴細(xì)胞從外周血中分離出來。本產(chǎn)品為無菌、低內(nèi)毒素水平的即用型分離液，其密度為1.077±0.001 g/mL（20℃）。本產(chǎn)品在傳統(tǒng)Ficoll-泛影葡胺基礎(chǔ)上進(jìn)行了優(yōu)化，使其在血液樣本加入后較長時(shí)間內(nèi)維持分離液的穩(wěn)定性，使用操作簡單且分離的淋巴細(xì)胞純度高、狀態(tài)好。

儲存與運(yùn)輸

冰袋(wet ice)運(yùn)輸；2-8℃避光保存，有效期12個(gè)月。

試劑盒組成

操作步驟

以分離1 mL人外周血中的淋巴細(xì)胞為例，血液和淋巴細(xì)胞分離液體積比為1:1-1:2，在此范圍內(nèi)適當(dāng)調(diào)整；選擇離心管時(shí)需注意，血液和淋巴細(xì)胞分離液總體積不超過離心管容積的三分之二。

1. 取新鮮抗凝全血（肝素、EDTA、枸櫞酸鈉等抗凝劑皆可）1 mL，加入等體積PBS或者無鈣鎂Hanks緩沖液稀釋，即得到2 mL稀釋的全血；

2. 吸取人外周血淋巴細(xì)胞分離液3 mL加入到15 mL無菌離心管中；

3. 將離心管傾斜45°，將2 mL稀釋后的血液沿管壁緩慢加入離心管中，使血液平鋪在人外周血淋巴細(xì)胞分離液上層；

4. 建議使用水平轉(zhuǎn)頭離心機(jī)離心，將離心管置于水平轉(zhuǎn)頭適配器中，降低離心機(jī)加減速（3-5檔為宜），室溫條件下800 g離心25 min；

5. 離心后，輕拿離心管置于管架上，可觀察到明顯的分層現(xiàn)象：最上層是血漿層；中上白膜層是淋巴細(xì)胞層；中下層為淋巴細(xì)胞分離液層；最下層為紅細(xì)胞和粒細(xì)胞層（參考附圖）；

6. 吸除最上層血漿層，小心吸取白膜層（淋巴細(xì)胞層）到新的無菌離心管；

7. 用8 mL PBS或其他緩沖液洗滌后，100 g離心10 min，棄上清；

8. 重復(fù)步驟7（可選）

9. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠盟枧囵B(yǎng)基或緩沖液重懸淋巴細(xì)胞。

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品在使用前需室溫充分平衡并顛倒混勻，分離時(shí)溫度以18-25℃為宜。

2. 為保持淋巴細(xì)胞的活性，血液最好選取采血2 h以內(nèi)的新鮮抗凝血液；如需對分離的淋巴細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的培養(yǎng)和檢測，請?jiān)诓裳头蛛x過程中注意無菌操作。

3. 稀釋或洗滌緩沖液，不可使用含鈣、鎂離子的緩沖液，以免導(dǎo)致血細(xì)胞凝聚。

4. 過多吸取淋巴細(xì)胞白膜層以外的成分，會導(dǎo)致交界處的一些粒細(xì)胞或血小板等被混入。

5. 由于不同血液樣本間的差異，可能對分離效果產(chǎn)生影響。可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整離心力和時(shí)間，參考離心力和時(shí)間范圍為：500-1000 g、20-30 min。

6. 將血液和淋巴細(xì)胞分離液混合一定時(shí)間后，出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降屬于正常現(xiàn)象。

7. 為了您的健康和安全，操作時(shí)請穿好實(shí)驗(yàn)服、戴好手套。

附圖：分離前后，各層示意圖

本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！