產(chǎn)品描述

本產(chǎn)品為精心優(yōu)化的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒，可增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的能力。

本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。

產(chǎn)品組成成分及保存

注意：1.為保證產(chǎn)品的有效性，請避免反復(fù)凍融。

2.配制好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基保存于2-8℃，有效期為2周，請根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量合理配制。

產(chǎn)品使用說明

1. 間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基的配制

① 室溫條件下融化添加劑及血清。（注意：若添加劑或血清中有沉淀物，屬正常現(xiàn)象，無須過濾，避免成分丟失。）

② 根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量，于無菌操作臺中配制完全培養(yǎng)基，建議每次配制50mL，先加細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基和胎牛血清，再加誘導(dǎo)分化添加劑。（配制比例見表一）

                         表一

2. 間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)步驟

①包被細(xì)胞培養(yǎng)瓶/板：向細(xì)胞培養(yǎng)器皿中加入0.1%明膠溶液，輕微晃動，使包被液完全覆蓋培養(yǎng)器皿底面，置于37℃培養(yǎng)箱中孵育30min，吸除液體即可使用。

②建議取第3~5代、純度達(dá)90%以上、狀態(tài)良好的間充質(zhì)干細(xì)胞，將其消化收集，使用含10%FBS的完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度，均勻鋪于包被好的培養(yǎng)瓶/板中，置于37℃，5%CO₂，飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（細(xì)胞接種詳情參考表二）

              表二

③待細(xì)胞匯合度達(dá)約90%時(shí)，即可進(jìn)行誘導(dǎo)分化。

④小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

（注意：完全培養(yǎng)基加入細(xì)胞前需提前置于37℃預(yù)熱。）

⑤每2~3day換用新鮮的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基。換液時(shí)，若細(xì)胞培養(yǎng)上清顏色變?yōu)槌吻宓狞S色，是由于細(xì)胞量較大，營養(yǎng)消耗較快導(dǎo)致的，請及時(shí)縮短換液周期。

⑥細(xì)胞誘導(dǎo)2~4周后，即可進(jìn)行茜素紅染色鑒定。（注意：請?jiān)陲@微鏡下確認(rèn)鈣結(jié)節(jié)形成后，再進(jìn)行染色鑒定。）

3. 茜素紅染色分析

① 細(xì)胞誘導(dǎo)分化結(jié)束后，小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，1×PBS潤洗1~2次，室溫固定30 min。（細(xì)胞固定液為4%中性甲醛溶液等，體積參考表二）

② 吸棄細(xì)胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入茜素紅染色液，染液體積請參考表二，室溫染色30min。（注意：染色液底部可能會有沉淀，吸取時(shí)盡量不要觸及底部。若細(xì)胞染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）

③ 吸出染色液，1×PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細(xì)胞染色效果，鈣鹽呈較深的橙紅色。（注意：染色液可重復(fù)使用，建議收集。）

質(zhì)量控制

ü 無菌檢測（細(xì)菌、真菌和支原體檢測）

ü pH測試

ü 滲透壓檢測

ü 內(nèi)毒素