項(xiàng)目介紹：

免疫電鏡雙標(biāo)是利用抗原抗體特異性結(jié)合原理，在一張超薄切片（鎳網(wǎng)）上，用兩種不同來(lái)源的特異性一抗分別與兩種待檢測(cè)抗原結(jié)合，然后用帶有兩種不同粒徑膠體金標(biāo)記的二抗分別與對(duì)應(yīng)種屬的一抗抗原復(fù)合物結(jié)合。在電子顯微鏡下膠體金為黑色顆粒狀物質(zhì)，根據(jù)膠體金顆粒大小在組織和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)上分別定位兩種抗原，實(shí)現(xiàn)兩種蛋白于亞細(xì)胞水平（如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等）的定位及空間位置關(guān)系分析。免疫電鏡雙抗標(biāo)記，需要選用不同來(lái)源的一抗。我司現(xiàn)有4nm和12nm山羊抗小鼠、山羊抗大鼠、山羊抗兔膠體金二抗。如提供其他來(lái)源的一抗，需要自行提供對(duì)應(yīng)的膠體金二抗進(jìn)行試驗(yàn)。

樣本準(zhǔn)備：

將可孵育抗體的超薄切片，撈于鎳網(wǎng)，干燥后防塵送樣。

實(shí)驗(yàn)步驟：

免疫標(biāo)記：

①?gòu)?fù)溫水合：鎳網(wǎng)從4℃取出用超純水懸浮5min；

②清洗：TBS室溫清洗3次，每次5min；

③封閉：1%BSA/TBS的封閉液室溫封閉30min；

④加一抗：將混合抗體與封閉液按一定稀釋比稀釋后4℃過(guò)夜孵育；

⑤清洗：室溫復(fù)溫后，TBS清洗3次，每次5min；

⑥加二抗：將混合二抗與二抗稀釋液按一定稀釋比稀釋，先室溫孵育20min，后轉(zhuǎn)37℃烘箱孵育1h，然后轉(zhuǎn)室溫復(fù)溫0.5h。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中防止干片。

⑦清洗：TBS清洗5次，每次5min后，超純水清洗5次，每次5min。

⑧鈾復(fù)染：鎳網(wǎng)于2%醋酸鈾飽和酒精溶液避光染色8min；70%酒精清洗3次；超純水清洗3次。

⑨烘干：清洗后的鎳網(wǎng)用濾紙吸干后放入網(wǎng)板中，37℃烘箱放置10min烘干備用。

備注：

1、如果公司無(wú)抗體，需要客戶自己提供抗體。市面上抗體大多未進(jìn)行免疫電鏡標(biāo)記驗(yàn)證，標(biāo)記效果不確定。未標(biāo)記成功收取一半費(fèi)用。

2、如果客戶使用本公司一抗，需額外收取一抗抗體使用費(fèi)130元/張。