產(chǎn)品簡(jiǎn)介

MTT全稱為3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide)，中文名簡(jiǎn)稱：噻唑藍(lán)。分子式為C₁₈H₁₆BrN₅S，分子量為414.32。

MTT常用于檢測(cè)細(xì)胞毒性和細(xì)胞增殖，其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，死細(xì)胞無(wú)此顯色反應(yīng)。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶標(biāo)儀測(cè)定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

傳統(tǒng)MTT檢測(cè)方法中，由于產(chǎn)生的甲臜是不溶于水的，需要先將上層含MTT底物的反應(yīng)液移除，再加入DMSO溶解甲臜，此步操作容易造成實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性、可現(xiàn)性較差。本試劑盒提供特殊的甲臜溶解劑，檢測(cè)時(shí)無(wú)需移除原有的含MTT底物反應(yīng)液，而是直接加入甲臜溶解劑，即可溶解甲臜，從而避免移除原有反應(yīng)液導(dǎo)致的誤差。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

冰袋（wet ice）運(yùn)輸；MTT溶液，-20℃避光保存；甲臜溶解劑，4°避光保存；有效期12個(gè)月。

使用說(shuō)明

1. 對(duì)于細(xì)胞增殖檢測(cè)，每孔建議種板100 μL 2000個(gè)細(xì)胞；對(duì)于細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，每孔建議種板100 μL 5000個(gè)細(xì)胞（具體視細(xì)胞大小、增殖速度調(diào)整）。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染或給藥預(yù)處理；

2. 每孔加入10 μL MTT溶液，置于培養(yǎng)箱中孵育4 h；

3. 向孔板內(nèi)加入100 uL甲臜溶解劑，輕敲孔板使其混勻，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育2-4 h，使甲臜溶解（孵育時(shí)間視細(xì)胞數(shù)量調(diào)整，可在顯微鏡下觀察待甲臜溶解即可檢測(cè)）；

4. 在570 nm處測(cè)量各孔的吸光值。如無(wú)570 nm濾光片，可以使用560-600 nm濾光片。

注意事項(xiàng)

1. 使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一定要注意蒸發(fā)的問(wèn)題。96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；也可以通過(guò)把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方來(lái)緩解蒸發(fā)。

2. 為減少實(shí)驗(yàn)操作導(dǎo)致的誤差，建議設(shè)置復(fù)孔，在加樣或者震蕩混合時(shí)，避免產(chǎn)生氣泡。

3. MTT溶液為黃色，使用前需避光室溫放置或20-25℃水浴片刻至全部融解后使用。長(zhǎng)時(shí)間光照會(huì)導(dǎo)致失效，如果溶液呈灰綠色，請(qǐng)勿使用。

4. 甲臜溶解劑如果有沉淀析出，可以室溫或37℃水浴以促進(jìn)溶解，待溶解混勻后再使用。

5. 為了您的健康和安全，操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴一次性手套。

本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！