產(chǎn)品簡介

CCK-8高靈敏快速檢測試劑盒，簡稱CCK-8 plus，是一種廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測試劑盒。其檢測原理在于，在電子耦合試劑存在的情況下，溶液中的WST-8化合物被活細胞內(nèi)脫氫酶還原成具有水溶性的橙黃色甲臜化合物，該物質(zhì)在450 nm處有最大吸收峰。甲臜量與活細胞數(shù)成正比，即細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

本試劑盒在常規(guī)CCK-8試劑盒基礎(chǔ)上進行優(yōu)化，僅需0.5至1小時即可完成檢測，檢測速度更快、靈敏度更高、線性范圍更寬。

儲存與運輸

冰袋（wet ice）運輸；2-8℃保存12個月有效；長期不用也可-20℃保存，24個月有效；建議避光保存。

組成

操作步驟

細胞活力/增殖/毒性檢測

1. 在96孔板中接種一定數(shù)量的細胞懸液100 μL，于培養(yǎng)箱（37℃，5% CO₂）預(yù)培養(yǎng)24小時。

2. 向培養(yǎng)板加入不同濃度的待測物質(zhì)，孵育適當?shù)臅r間（如：6、12、24、48或72小時）。

3. 向每孔加入10 μL CCK-8 plus試劑（注意不要在孔中產(chǎn)生氣泡，它會影響吸光值）。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8 plus之前更換新鮮培養(yǎng)基，以去掉藥物影響。

4. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育0.5-2小時（對于大多數(shù)情況孵育0.5-1小時左右就可以了。時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，初次實驗時可以在0.5、1、1.5、2和3小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗）。

5. 用酶標儀測定在450nm處的吸光度（可以使用大于600nm的波長，例如650nm，作為參考波長進行雙波長測定）。

6. 如果暫時不檢測OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的 HCl 或者1% SDS (W/V)溶液，避光保存在4℃條件，在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。

活力計算：

細胞活力（％）=[A(實驗孔)－A(空白孔)]／[A(對照孔)－A(空白孔)]×100%

細胞抑制率（％）=[A(對照孔)－A(實驗孔)]／[A(對照孔)－A(空白孔)]×100%

A（實驗孔）：含細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白孔）：含培養(yǎng)基、CCK-8溶液、藥物，而沒有細胞的孔的吸光度

A（對照組）：含細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

注意事項

1. 本試劑盒檢測原理是依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，樣品中如有較多還原劑(例如一些抗氧化劑)會干擾檢測，需設(shè)法去除。

2. 大多數(shù)情況下，CCK-8高靈敏快速檢測試劑加入細胞后僅需孵育0.5-1小時就可以獲得理想的信號值，但不同的細胞類型和細胞密度等實驗條件下，所需的孵育時間可能存在一定的差別。

3. 如果沒有450 nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm檢測靈敏度最高。

4. 培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

5. 加檢測試劑時避免產(chǎn)生氣泡，否則會干擾檢測結(jié)果。

6. 當試劑從-20℃解凍時，建議4℃或者常溫解凍，不建議37℃解凍。可分裝保存，避免反復(fù)凍融。

7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！