產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱(chēng)：真菌清除劑（2000×）

儲(chǔ)存條件：-20℃避光

產(chǎn)品描述

真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中最常見(jiàn)的一種污染，尤其在霉雨季節(jié)，霉菌污染尤為嚴(yán)重。另外由于真菌可以通過(guò)孢子繁殖，因此一旦污染很容易發(fā)生擴(kuò)散。常見(jiàn)的真菌感染有煙曲霉菌、黑曲霉菌、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌污染等。

霉菌污染的細(xì)胞培養(yǎng)液短期內(nèi)一般不會(huì)渾濁，可在培養(yǎng)液表面形成白色或黃色漂浮物（斑點(diǎn)狀，易于觀察），倒置顯微鏡高倍鏡下可見(jiàn)明顯的絲狀、管狀或是樹(shù)枝狀的菌絲縱橫交錯(cuò)在細(xì)胞間。念珠菌和酵母菌污染一般會(huì)成卵圓形散在細(xì)胞周邊，并且酵母菌污染會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)液渾濁。真菌污染會(huì)與細(xì)胞搶奪營(yíng)養(yǎng)，還會(huì)釋放次級(jí)代謝物毒害細(xì)胞，造成細(xì)胞活力變差，生長(zhǎng)速度變慢，甚至死亡。

真菌清除劑用于防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的真菌（包括酵母）污染，還可用于消除細(xì)胞培養(yǎng)物中的真菌（含酵母）污染，療效遠(yuǎn)超真菌抗生素兩性霉素B，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的真菌污染，如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的療效。

真菌清除試劑經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，只需1~3天就可以抑制真菌增長(zhǎng)，一周左右即可清除真菌污染。對(duì)細(xì)胞基本無(wú)害，具有高效、特異性殺滅的特點(diǎn)，最大程度上挽救珍貴的細(xì)胞，減少真菌污染帶來(lái)的損失。

使用方法

從-20℃冰箱內(nèi)取出真菌清除劑，將試劑管瞬時(shí)離心（3000rpm，3~5s）后放置于EP管架上，用75%的酒精噴灑試劑管的表面，在生物安全柜中進(jìn)行無(wú)菌操作；

以T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶為例

清除真菌污染操作規(guī)程

由于真菌污染前期不易發(fā)覺(jué)，若顯微鏡下出現(xiàn)菌絲/菌體/菌團(tuán)的，說(shuō)明污染已經(jīng)非常嚴(yán)重，若細(xì)胞較為脆弱，如胚胎干細(xì)胞（H1、H9、iPS），建議采用的稀釋倍數(shù)為2000×，如：6mL的完全培養(yǎng)基加入3μL的真菌清除劑混勻，連續(xù)加藥培養(yǎng)1~2周（或傳代3次）后，檢測(cè)是否還存在真菌污染。

對(duì)于常規(guī)細(xì)胞（細(xì)胞系、原代、干細(xì)胞），需要酌情增加藥物濃度以提高清除真菌的效率，建議提高至1000×濃度清除真菌，如：6mL的完全培養(yǎng)基加入6μL的真菌清除劑混勻。一天換液兩次，建議上午進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行一次加藥培養(yǎng)基換液，下午離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室之前進(jìn)行一次加藥培養(yǎng)基換液，第二天和第三天重復(fù)此過(guò)程，第四天開(kāi)始即可1天1次換液，連續(xù)加藥培養(yǎng)1~2周（或傳代3次）后，檢測(cè)是否還存在真菌污染。

圖1 細(xì)胞被不同真菌污染圖片示例

注意：

①貼壁細(xì)胞換液或傳代前，在顯微鏡下將貼在瓶底的菌體/絲位置在培養(yǎng)瓶上標(biāo)記出來(lái)，棄去舊的培養(yǎng)基，用PBS將所有菌體/絲沖洗掉，再用PBS清洗細(xì)胞表面2次。

②若細(xì)胞達(dá)到可傳代比例，請(qǐng)及時(shí)傳代并鋪入新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，換新瓶的過(guò)程也可有效規(guī)避培養(yǎng)瓶壁上殘留真菌或孢子的污染；

③真菌清除干凈后，必須進(jìn)行傳代并鋪入新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，且在新瓶中加藥維持1~2天后，才可以撤掉真菌清除劑，避免在舊瓶中撤藥后舊瓶壁上的真菌或孢子殘留造成二次污染；

預(yù)防真菌污染操作規(guī)程

若細(xì)胞需連續(xù)培養(yǎng)，且培養(yǎng)階段處于梅雨季節(jié)或所處城市較為潮濕，建議每2~3周進(jìn)行定期預(yù)防。在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量真菌清除劑，通常推薦使用的稀釋倍數(shù)為3000×，如：6mL的細(xì)胞培養(yǎng)基加入2μL的真菌清除劑混勻。連續(xù)加藥培養(yǎng)1周后即可有效防止真菌污染或抑制真菌增殖。

質(zhì)量控制

R通過(guò)真菌、真菌、支原體、內(nèi)毒素檢測(cè)。

R通過(guò)滲透壓、pH 檢測(cè)。

R通過(guò)產(chǎn)品性能檢測(cè)。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。

-20℃避光保存，保質(zhì)期2年。

實(shí)驗(yàn)流程圖

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

高效性，1天即可有效抑制真菌的增殖；

高特異性，特異性清除真菌污染；

無(wú)耐藥性，活性成分為多肽類(lèi)，不會(huì)產(chǎn)生耐藥性；

高利用率，未被利用的成分可降解為氨基酸被細(xì)胞利用；

高安全性，對(duì)細(xì)胞幾乎無(wú)毒性，已在上百種細(xì)胞上驗(yàn)證。

特別提醒

①使用本試劑前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)；

②本產(chǎn)品經(jīng)0.1μm 過(guò)濾除菌，使用本產(chǎn)品時(shí)無(wú)需過(guò)濾，可直接加入培養(yǎng)基使用；

③本試劑具有專(zhuān)利技術(shù)，-20℃保存時(shí)不凍結(jié)，使用時(shí)無(wú)需解凍，從-20℃取出即可使用；

④為了發(fā)揮最好的藥效，含藥培養(yǎng)基建議現(xiàn)配現(xiàn)用，如果加藥培養(yǎng)基未用完，于4℃冰箱中避光保存，2周內(nèi)用完，使用培養(yǎng)基前需預(yù)熱至37℃；

⑤如遇個(gè)別細(xì)胞對(duì)本試劑敏感，細(xì)胞生長(zhǎng)速度明顯受影響時(shí)，建議減量使用或進(jìn)行稀釋度測(cè)試；

⑥真菌清除劑處理后，會(huì)有很好的預(yù)防和清除效果，但是如果環(huán)境、耗材、試劑中仍有污染源存在，細(xì)胞可能會(huì)再次污染，因此需做好適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施；

⑦加入本產(chǎn)品進(jìn)行真菌預(yù)防和清除時(shí)，無(wú)需添加雙抗（青霉素-鏈霉素）；

⑧為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作；

⑨本產(chǎn)品僅供研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不得用于診斷或治療。