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Delf血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化試劑盒

目錄價 ￥ 1450.00 一鍵復(fù)制產(chǎn)品信息

貨號Delf-16623

規(guī)格 200ml

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355185756@qq.com
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安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號合肥國家大學(xué)科技園A401室

產(chǎn)品詳情

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

儲存條件

Vascular Smooth Muscle Cell Calcification Kit

血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化試劑盒

200ml

避光

產(chǎn)品描述

此產(chǎn)品是精心優(yōu)化的血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化試劑盒，包括適合血管平滑肌細(xì)胞鈣化的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、鈣化因子和雙抗。

本產(chǎn)品可增強(qiáng)VSMCs細(xì)胞的鈣化能力。本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。

試劑盒組成部分

規(guī)格	200mL/Kit
規(guī)格	體積	數(shù)量
Vascular Smooth Muscle Cell Calcification Basal Medium 血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化基礎(chǔ)培養(yǎng)基	173mL	1
Supplement Mix 鈣化因子	25mL	1
Penicillin-Streptomycin 雙抗	2mL	1

使用方法

血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基的配制

1. 使用前，請將鈣化因子置于2-8℃環(huán)境中過夜解凍直至鈣化因子完全溶解，解凍后輕晃試劑瓶以確保鈣化因子混合均勻，隨后即可使用。

注意：解凍后的鈣化因子中可能會含有少量絮狀沉淀，這些物質(zhì)對產(chǎn)品質(zhì)量無影響。不建議采取過濾的方法去除沉淀物，此操作會導(dǎo)致鈣化因子中部分營養(yǎng)物質(zhì)流失。

2. 用75%乙醇擦拭試劑盒中各瓶/管的開口外壁，室溫放置數(shù)秒使酒精揮發(fā)。

3. 在超凈臺中無菌地打開以上各瓶/管。

4. 將25 mL鈣化因子和2 mL雙抗全部加入173 mL血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，即可配成200 mL血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基。

注意：

① 無菌吸取少量基礎(chǔ)培養(yǎng)基洗滌各瓶/管，盡可能的將所有組分完整的加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。

② 輕晃配制好的完全培養(yǎng)基，確保混合均勻之后即可使用。

③ 完全培養(yǎng)基試劑盒中的每個成分均為無菌分裝，但為確保完全無菌，也可以將混合后的完全培養(yǎng)基進(jìn)行再次過濾除菌（0.22 μm 濾膜）。

培養(yǎng)器皿表面的包被

為了避免誘導(dǎo)過程中血管平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)漂浮現(xiàn)象，建議對鈣化誘導(dǎo)使用的培養(yǎng)器皿表面用促貼壁試劑包被。

所需材料

促貼壁試劑（AS01-001D）

操作

1. 加適量促貼壁試劑到培養(yǎng)器皿中，能覆蓋整個培養(yǎng)器皿底面的量即可。

2. 搖勻液體使其覆蓋整個培養(yǎng)器皿的底面。

3. 將鋪有促貼壁試劑的培養(yǎng)器皿放置在超凈臺至少30min。

4. 30 min后棄去促貼壁試劑，待培養(yǎng)器皿晾干后，即可用于接種細(xì)胞。

注意: 包被促貼壁試劑的培養(yǎng)器皿在無菌和不蒸干的條件下，可以在4℃保存兩周。

血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化操作規(guī)程

所需材料

n 0.25% 胰蛋白酶-EDTA

n Phosphate-Buffered Saline (1×PBS)

n 血管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基

n 血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化試劑盒

操作

注意：本操作規(guī)程以六孔板為例

1. 將血管平滑肌細(xì)胞置于37℃，5% CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2. 當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80-90%時，用0.25% 胰蛋白酶-EDTA進(jìn)行消化。

3. 將消化下來的血管平滑肌細(xì)胞按照2×10^4 cells/cm2 的細(xì)胞密度接種在事先包被促貼壁試劑的六孔板中，每孔加入2 mL完全培養(yǎng)基。。

4. 將細(xì)胞置于37℃，5% CO?的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70%左右時，小心的將孔內(nèi)完全培養(yǎng)基吸走，向六孔板中加入2 mL血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基。

6. 每隔2-3天換用新鮮的血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化完全培養(yǎng)基（使用前需預(yù)熱至37℃）

7. 誘導(dǎo)15-20天后，視細(xì)胞的形態(tài)變化及生長情況，用鈣化鑒定試劑盒進(jìn)行染色。

注意：為防止誘導(dǎo)后的細(xì)胞脫落，建議鈣化過程中出現(xiàn)大量鈣結(jié)節(jié)之后，換液形式變?yōu)槊績商煲淮伟肓繐Q液。

產(chǎn)品穩(wěn)定性及保存條件

1.所有產(chǎn)品均需避光保存。

2.保存條件及有效期

試劑名稱	保存條件	有效期
血管平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)鈣化基礎(chǔ)培養(yǎng)基	2-8℃	1年
鈣化因子	-20℃	2年
配制好的完全培養(yǎng)基	2-8℃	1個月

3.所有產(chǎn)品請于保質(zhì)期內(nèi)使用，超過保質(zhì)期，必須放棄使用。

4.為確保產(chǎn)品效果，請避免反復(fù)凍融相關(guān)產(chǎn)品。

質(zhì)量控制

血管平滑肌細(xì)胞鈣化誘導(dǎo)培養(yǎng)基已用各種屬血管平滑肌細(xì)胞進(jìn)行了性能測試。

主要的鑒定標(biāo)準(zhǔn)包括：

? 無菌檢測（細(xì)菌、真菌和支原體檢測）

? pH測試

? 滲透壓檢測

? 內(nèi)毒素檢測

常見問題

問：細(xì)胞的運(yùn)輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細(xì)胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢是省去復(fù)蘇的步驟，細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞：采用干冰運(yùn)輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長期存儲，擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。

問：為什么你們的細(xì)胞和其他公司的細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺。也有少部分細(xì)胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶的意愿進(jìn)行選擇！

問：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎？

答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會比正常培養(yǎng)時所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細(xì)胞存活，控制生長速度，不可以用來做細(xì)胞培養(yǎng)使用。

問：培養(yǎng)細(xì)胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點(diǎn)是什么？

答：細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn)，一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細(xì)胞也會有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常，白色的圓點(diǎn)是分散分布的，聚團(tuán)類的懸浮細(xì)胞可能會聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問：剛買回來的細(xì)胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購買原代細(xì)胞的客戶，要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗。