產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱：真菌清除劑（2000×）

儲存條件：-20℃避光

產(chǎn)品描述

真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中最常見的一種污染，尤其在霉雨季節(jié)，霉菌污染尤為嚴(yán)重。另外由于真菌可以通過孢子繁殖，因此一旦污染很容易發(fā)生擴散。常見的真菌感染有煙曲霉菌、黑曲霉菌、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌污染等。

霉菌污染的細(xì)胞培養(yǎng)液短期內(nèi)一般不會渾濁，可在培養(yǎng)液表面形成白色或黃色漂浮物（斑點狀，易于觀察），倒置顯微鏡高倍鏡下可見明顯的絲狀、管狀或是樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細(xì)胞間。念珠菌和酵母菌污染一般會成卵圓形散在細(xì)胞周邊，并且酵母菌污染會導(dǎo)致培養(yǎng)液渾濁。真菌污染會與細(xì)胞搶奪營養(yǎng)，還會釋放次級代謝物毒害細(xì)胞，造成細(xì)胞活力變差，生長速度變慢，甚至死亡。

真菌清除劑用于防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中的真菌（包括酵母）污染，還可用于消除細(xì)胞培養(yǎng)物中的真菌（含酵母）污染，療效遠(yuǎn)超真菌抗生素兩性霉素B，對細(xì)胞培養(yǎng)過程中的真菌污染，如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的療效。

真菌清除試劑經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實驗驗證，只需1~3天就可以抑制真菌增長，一周左右即可清除真菌污染。對細(xì)胞基本無害，具有高效、特異性殺滅的特點，最大程度上挽救珍貴的細(xì)胞，減少真菌污染帶來的損失。

使用方法

從-20℃冰箱內(nèi)取出真菌清除劑，將試劑管瞬時離心（3000rpm，3~5s）后放置于EP管架上，用75%的酒精噴灑試劑管的表面，在生物安全柜中進(jìn)行無菌操作；

以T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶為例

清除真菌污染操作規(guī)程

由于真菌污染前期不易發(fā)覺，若顯微鏡下出現(xiàn)菌絲/菌體/菌團(tuán)的，說明污染已經(jīng)非常嚴(yán)重，若細(xì)胞較為脆弱，如胚胎干細(xì)胞（H1、H9、iPS），建議采用的稀釋倍數(shù)為2000×，如：6mL的完全培養(yǎng)基加入3μL的真菌清除劑混勻，連續(xù)加藥培養(yǎng)1~2周（或傳代3次）后，檢測是否還存在真菌污染。

對于常規(guī)細(xì)胞（細(xì)胞系、原代、干細(xì)胞），需要酌情增加藥物濃度以提高清除真菌的效率，建議提高至1000×濃度清除真菌，如：6mL的完全培養(yǎng)基加入6μL的真菌清除劑混勻。一天換液兩次，建議上午進(jìn)入實驗室進(jìn)行一次加藥培養(yǎng)基換液，下午離開實驗室之前進(jìn)行一次加藥培養(yǎng)基換液，第二天和第三天重復(fù)此過程，第四天開始即可1天1次換液，連續(xù)加藥培養(yǎng)1~2周（或傳代3次）后，檢測是否還存在真菌污染。

圖1 細(xì)胞被不同真菌污染圖片示例

注意：

①貼壁細(xì)胞換液或傳代前，在顯微鏡下將貼在瓶底的菌體/絲位置在培養(yǎng)瓶上標(biāo)記出來，棄去舊的培養(yǎng)基，用PBS將所有菌體/絲沖洗掉，再用PBS清洗細(xì)胞表面2次。

②若細(xì)胞達(dá)到可傳代比例，請及時傳代并鋪入新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，換新瓶的過程也可有效規(guī)避培養(yǎng)瓶壁上殘留真菌或孢子的污染；

③真菌清除干凈后，必須進(jìn)行傳代并鋪入新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，且在新瓶中加藥維持1~2天后，才可以撤掉真菌清除劑，避免在舊瓶中撤藥后舊瓶壁上的真菌或孢子殘留造成二次污染；

預(yù)防真菌污染操作規(guī)程

若細(xì)胞需連續(xù)培養(yǎng)，且培養(yǎng)階段處于梅雨季節(jié)或所處城市較為潮濕，建議每2~3周進(jìn)行定期預(yù)防。在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量真菌清除劑，通常推薦使用的稀釋倍數(shù)為3000×，如：6mL的細(xì)胞培養(yǎng)基加入2μL的真菌清除劑混勻。連續(xù)加藥培養(yǎng)1周后即可有效防止真菌污染或抑制真菌增殖。

質(zhì)量控制

R通過真菌、真菌、支原體、內(nèi)毒素檢測。

R通過滲透壓、pH 檢測。

R通過產(chǎn)品性能檢測。

運輸與保存方法

冰袋運輸。

-20℃避光保存，保質(zhì)期2年。

實驗流程圖

產(chǎn)品優(yōu)勢

高效性，1天即可有效抑制真菌的增殖；

高特異性，特異性清除真菌污染；

無耐藥性，活性成分為多肽類，不會產(chǎn)生耐藥性；

高利用率，未被利用的成分可降解為氨基酸被細(xì)胞利用；

高安全性，對細(xì)胞幾乎無毒性，已在上百種細(xì)胞上驗證。

特別提醒

①使用本試劑前請仔細(xì)閱讀說明書；

②本產(chǎn)品經(jīng)0.1μm 過濾除菌，使用本產(chǎn)品時無需過濾，可直接加入培養(yǎng)基使用；

③本試劑具有專利技術(shù)，-20℃保存時不凍結(jié)，使用時無需解凍，從-20℃取出即可使用；

④為了發(fā)揮最好的藥效，含藥培養(yǎng)基建議現(xiàn)配現(xiàn)用，如果加藥培養(yǎng)基未用完，于4℃冰箱中避光保存，2周內(nèi)用完，使用培養(yǎng)基前需預(yù)熱至37℃；

⑤如遇個別細(xì)胞對本試劑敏感，細(xì)胞生長速度明顯受影響時，建議減量使用或進(jìn)行稀釋度測試；

⑥真菌清除劑處理后，會有很好的預(yù)防和清除效果，但是如果環(huán)境、耗材、試劑中仍有污染源存在，細(xì)胞可能會再次污染，因此需做好適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施；

⑦加入本產(chǎn)品進(jìn)行真菌預(yù)防和清除時，無需添加雙抗（青霉素-鏈霉素）；

⑧為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；

⑨本產(chǎn)品僅供研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不得用于診斷或治療。