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PLC-PRF-5-sorafenib(人肝癌亞歷山大索拉非尼耐藥株)

目錄價(jià) ￥ 0.00 一鍵復(fù)制產(chǎn)品信息

別稱(chēng)PLC-PRF-5-sorafenib

貨號(hào)Delf-16474

規(guī)格 1×10?/T25培養(yǎng)瓶

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產(chǎn)品推薦

聯(lián)系方式

電話：
400-1016-218
郵箱：
355185756@qq.com
地址：
安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號(hào)合肥國(guó)家大學(xué)科技園A401室

產(chǎn)品詳情

產(chǎn)品描述

種屬: 人源（Homo sapiens）

組織來(lái)源: 肝臟（Liver）

疾病: 肝癌（Hepatoma）

年齡: 未知（Unknown）

性別: 未知（Unknown）

細(xì)胞類(lèi)型: 上皮細(xì)胞（Epithelial）

生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)（Adherent）

拆包 & 存儲(chǔ)

1. 請(qǐng)立即檢查包裝袋是否有破損或漏液

2. 請(qǐng)立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進(jìn)行培養(yǎng)傳代

注意：如為凍存管，請(qǐng)收到后立即解凍培養(yǎng)。若來(lái)不及解凍，請(qǐng)儲(chǔ)存于液氮中（存儲(chǔ)于負(fù)80度，會(huì)降低細(xì)胞存活率）

培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟

對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，寄送前，我們會(huì)將培養(yǎng)基充滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞的脫落。

1. 收到細(xì)胞產(chǎn)品后，請(qǐng)注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。因在運(yùn)輸過(guò)程中存在顛簸，且有些細(xì)胞對(duì)溫度變化也很敏感，可能存在一些細(xì)胞脫落漂浮的情況，這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞，請(qǐng)勿丟棄，可離心富集后傳代使用。

2. 對(duì)于貼壁的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基，至剩余5-8mL左右，隨后將細(xì)胞置于含有5%CO?的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)瓶請(qǐng)立即傳代。

3. 對(duì)于懸浮的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于含有5% CO? 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

凍存細(xì)胞操作步驟

注意：為保存細(xì)胞的高存活率，請(qǐng)收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。

1.將凍存管置于37℃ 水浴中來(lái)回晃動(dòng)，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。

2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開(kāi)始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。

3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有凍存液的上清。

4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。

5. 將細(xì)胞置于含有5%CO?的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)

1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基, 加入PBS清洗一次。

2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過(guò)程大約需要3 至5分鐘（此處為12.5 cm2 培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實(shí)際情況增減用量）。

3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。

4. 離心200x g/5 min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸, 取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細(xì)胞完全培養(yǎng)基至總體積為4mL。

5. 將細(xì)胞置于含有5%CO?的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

傳代比例：建議 1:2 至 1:4（以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算）

培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。

注意：

耐藥細(xì)胞，需先無(wú)藥培養(yǎng)穩(wěn)定后保種再進(jìn)行加藥培養(yǎng)，按

照3次梯度加藥：最大劑量1/4，最大劑量1/2，最大劑量。

完全培養(yǎng)基配制

該細(xì)胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM), 配置完全培養(yǎng)基時(shí)需加入 10%FBS，1% Anti-Anti。藥物抗性維持加藥濃度為10 uM Sorafenib。

使用范圍

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用。

操作流程

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代與凍存操作流程下載

細(xì)胞服務(wù)告知書(shū)文檔下載

常見(jiàn)問(wèn)題

問(wèn)：細(xì)胞的運(yùn)輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細(xì)胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢(shì)是省去復(fù)蘇的步驟，細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞：采用干冰運(yùn)輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期存儲(chǔ)，擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢(shì)是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。

問(wèn)：為什么你們的細(xì)胞和其他公司的細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫(kù)的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺(tái)。也有少部分細(xì)胞為客戶(hù)提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶(hù)的意愿進(jìn)行選擇！

問(wèn)：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎？

答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會(huì)比正常培養(yǎng)時(shí)所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細(xì)胞存活，控制生長(zhǎng)速度，不可以用來(lái)做細(xì)胞培養(yǎng)使用。

問(wèn)：培養(yǎng)細(xì)胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點(diǎn)是什么？

答：細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn)，一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細(xì)胞也會(huì)有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常，白色的圓點(diǎn)是分散分布的，聚團(tuán)類(lèi)的懸浮細(xì)胞可能會(huì)聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問(wèn)：剛買(mǎi)回來(lái)的細(xì)胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶(hù)收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購(gòu)買(mǎi)原代細(xì)胞的客戶(hù)，要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對(duì)于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗(yàn)。